| 主要英文缩略词 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 第一部分：肺癌功能性单抗的筛选与鉴定 | 第13-69页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 一、材料与方法 | 第15-26页 |
| (一) 实验材料 | 第15-18页 |
| 1.细胞系 | 第15页 |
| 2.组织标本 | 第15页 |
| 3.动物 | 第15页 |
| 4.主要试剂及耗材 | 第15-17页 |
| 5.主要仪器 | 第17-18页 |
| 6.分析软件 | 第18页 |
| (二) 实验方法 | 第18-26页 |
| 1.细胞培养 | 第18-19页 |
| 2.无血清杂交瘤上清的收集 | 第19页 |
| 3.ELISA酶联免疫吸附实验 | 第19-20页 |
| 4.抗肺癌单克隆抗体的纯化 | 第20页 |
| 5.细胞免疫荧光实验 | 第20-22页 |
| 6.流式细胞荧光实验 | 第22页 |
| 7.免疫组化实验 | 第22-23页 |
| 8.抗体体外功能实验 | 第23-25页 |
| 9.裸鼠体内移植瘤抑制实验 | 第25页 |
| 10.统计分析 | 第25-26页 |
| 二、结果 | 第26-62页 |
| 1.肺癌功能性单抗的制备与初筛 | 第26页 |
| 2.肺癌单抗隆抗体类和亚类的测定 | 第26页 |
| 3.肺癌杂交瘤单抗产量的测定 | 第26页 |
| 4.固定细胞免疫荧光检测单克隆抗体与肺癌细胞的反应 | 第26-31页 |
| 5.活细胞免疫荧光检测单克隆抗体与肺癌细胞的反应 | 第31-33页 |
| 6.流式细胞术检测肺癌单克隆抗体与肺癌细胞的反应 | 第33-36页 |
| 7.肺癌病例资料的收集 | 第36页 |
| 8.免疫组化鉴定肺癌单克隆抗体的特异性 | 第36-51页 |
| 9.单抗40E11体外作用于肺癌细胞的研究 | 第51-55页 |
| ·单抗40E11的纯化 | 第51-53页 |
| ·单抗40E11体外对肺癌细胞增殖作用的影响 | 第53页 |
| ·单抗40E11体外对肺癌细胞与基质粘附作用的影响 | 第53-54页 |
| ·单抗40E11体外对肺癌细胞侵袭的影响 | 第54页 |
| ·单抗40E11体外对肺癌细胞迁移的影响 | 第54-55页 |
| 10.单抗24D4体外作用于肺癌细胞的功能研究 | 第55-58页 |
| ·单抗24D4的纯化 | 第55页 |
| ·单抗24D4体外对肺癌细胞增殖作用的影响 | 第55-57页 |
| ·单抗24D4体外对肺癌细胞与基质粘附作用的影响 | 第57页 |
| ·单抗24D4体外对肺癌细胞侵袭的影响 | 第57页 |
| ·单抗24D4体外对肺癌细胞迁移的影响 | 第57-58页 |
| 11.体内裸鼠移植瘤抑制实验筛选鉴定功能性肺癌单抗 | 第58-60页 |
| ·E11单抗靶向肺癌细胞治疗肺癌的体外实验研究 | 第60-62页 |
| ·大量制备40E11纯化抗体 | 第60页 |
| ·抗体40E11靶向肺癌细胞治疗肺癌的体内实验 | 第60-62页 |
| 三、讨论 | 第62-68页 |
| 小结 | 第68-69页 |
| 第二部分：肺癌功能性单抗识别的抗原基因的分离与鉴定 | 第69-102页 |
| 前言 | 第69-71页 |
| 一、材料与方法 | 第71-85页 |
| (一) 实验材料 | 第71-75页 |
| 1.细胞系 | 第71页 |
| 2.主要试剂及耗材 | 第71-73页 |
| 3.主要仪器 | 第73-74页 |
| 4.PCR引物 | 第74页 |
| 5.分析软件 | 第74-75页 |
| (二) 实验方法 | 第75-85页 |
| 1.细胞培养 | 第75页 |
| 2.无血清上清的收集 | 第75页 |
| 3.抗肺癌单克隆抗体的纯化 | 第75-76页 |
| 4.细胞免疫荧光 | 第76-77页 |
| 5.细胞蛋白的提取 | 第77-78页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第77页 |
| ·细胞水溶性蛋白与膜溶性蛋白的提取 | 第77页 |
| ·BCA蛋白定量法 | 第77-78页 |
| 6.抗原的亲和纯化 | 第78页 |
| ·抗体亲和层析柱的制备 | 第78页 |
| ·亲和层析纯化抗原蛋白 | 第78页 |
| 7.免疫印迹Western blotting | 第78-79页 |
| 8.质谱鉴定 | 第79页 |
| 9.免疫共沉淀 | 第79-80页 |
| 10.基因敲降后固定细胞免疫荧光 | 第80页 |
| 11.基因敲降后体外功能的研究 | 第80-84页 |
| ·细胞转染 | 第80-81页 |
| ·细胞转染效率的检测 | 第81-83页 |
| ·mRNA水平检测 | 第81-82页 |
| ·蛋白水平检测 | 第82-83页 |
| ·基因敲降后细胞增殖实验 | 第83页 |
| ·基因敲降后流式细胞周期测定 | 第83页 |
| ·基因敲降后细胞与基质粘附实验 | 第83-84页 |
| ·基因敲降后细胞侵袭实验 | 第84页 |
| ·基因敲降后细胞迁移实验 | 第84页 |
| 12.统计分析 | 第84-85页 |
| 二、结果 | 第85-96页 |
| 1.肺癌功能性单克隆抗体的纯化 | 第85页 |
| 2.Western blotting鉴定功能性抗原蛋白分子量 | 第85-86页 |
| 3.单抗靶抗原蛋白提取方法的优化与筛选 | 第86-87页 |
| 4.亲和层析纯化单抗靶抗原蛋白 | 第87页 |
| 5.蛋白的质谱鉴定 | 第87-89页 |
| 6.抗原基因的回证研究 | 第89-92页 |
| ·细胞免疫荧光共定位验证40E11识别的抗原基因 | 第89-90页 |
| ·免疫共沉淀验证40E11识别的抗原基因 | 第90页 |
| ·基因敲降验证40E11识别的抗原基因 | 第90-91页 |
| ·基因敲降后细胞免疫荧光验证40E11识别的抗原基因 | 第91-92页 |
| 7.siRNA瞬时敲降抗原基因对肺癌细胞体外功能的影响 | 第92-96页 |
| ·siRNA序列对抗原基因敲降效率的检测 | 第92-93页 |
| ·抗原基因敲降后对肺癌细胞增殖的影响 | 第93页 |
| ·抗原基因敲降后对肺癌细胞与基质粘附的影响 | 第93-94页 |
| ·抗原基因敲降后对肺癌细胞侵袭的影响 | 第94页 |
| ·抗原基因敲降后对肺癌细胞迁移运动的影响 | 第94-95页 |
| ·抗原基因敲降后对肺癌细胞周期的影响 | 第95-96页 |
| 三、讨论 | 第96-100页 |
| 小结 | 第100-102页 |
| 文献综述 | 第102-119页 |
| 参考文献 | 第111-119页 |
| 附录 | 第119-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第131-132页 |
| 基金资助情况 | 第132页 |
