| 中文摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-19页 |
| 英文缩略词表 | 第19-21页 |
| 前言 | 第21-25页 |
| 第一章 Cr(Ⅵ)诱导L-02肝细胞凋亡 | 第25-46页 |
| ·材料 | 第25-29页 |
| ·细胞系 | 第25页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·主要溶液配制 | 第27-28页 |
| ·Western一抗以及二抗 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-37页 |
| ·肝细胞的培养 | 第29页 |
| ·肝细胞存活率以及增值曲线的测定 | 第29-30页 |
| ·细胞DNA损伤检测(DNA-Ladder法) | 第30-31页 |
| ·细胞内蛋白含量的测定 | 第31-32页 |
| ·Western Blot测定 | 第32-34页 |
| ·肝细胞凋亡的检测 | 第34-35页 |
| ·Capase-3活性检测 | 第35-36页 |
| ·MDA、GSH、SOD活性检测 | 第36-37页 |
| ·统计学分析 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-43页 |
| ·Cr(Ⅵ)对肝细胞增殖作用以及存活率的影响 | 第37-39页 |
| ·Cr(Ⅵ)诱导肝细胞DNA损伤 | 第39-40页 |
| ·Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡 | 第40-41页 |
| ·Cr(Ⅵ)对肝细胞凋亡通路的影响 | 第41页 |
| ·Cr(Ⅵ)对Caspase-3活性影响 | 第41-42页 |
| ·Cr(Ⅵ)对MDA、GSH以及SOD含量的影响 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-46页 |
| 第二章 Cr(Ⅵ)诱导肝细胞线粒体呼吸链功能紊乱 | 第46-66页 |
| ·材料 | 第46-49页 |
| ·细胞系 | 第46页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第46-47页 |
| ·PCR引物 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·常用溶液配制 | 第47-48页 |
| ·western一抗以及二抗 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-57页 |
| ·肝细胞线粒体的提取 | 第49页 |
| ·ST3、ST4以及RCR的测定 | 第49-50页 |
| ·线粒体呼吸链复合体I-V活性的测定 | 第50-52页 |
| ·Real-time PCR法定量检测基因表达 | 第52-54页 |
| ·线粒体呼吸链复合体I-V水平的测定 | 第54页 |
| ·线粒体跨膜电位检测 | 第54页 |
| ·线粒体通透性转运孔(PTP)开放度检测 | 第54-55页 |
| ·AST、ALT检测 | 第55-56页 |
| ·肝细胞内腺苷酸含量、ATP/ADP比值以及能荷的检测 | 第56页 |
| ·统计学分析 | 第56-57页 |
| ·结果 | 第57-64页 |
| ·Cr(Ⅵ)对肝细胞线粒体呼吸的抑制作用 | 第57-61页 |
| ·Cr(Ⅵ)对肝细胞线粒体能量代谢作用的影响 | 第61-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第三章 Cr(Ⅵ)诱导的肝细胞线粒体呼吸链功能紊乱在凋亡中的作用 | 第66-87页 |
| ·材料 | 第66-68页 |
| ·细胞系 | 第66页 |
| ·PCR引物 | 第66页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第66-67页 |
| ·主要仪器耗材 | 第67页 |
| ·主要溶液配制 | 第67-68页 |
| ·Western一抗以及二抗 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-72页 |
| ·细胞内ROS水平的测定 | 第68-69页 |
| ·Cr(Ⅵ)还原速率的测定 | 第69-70页 |
| ·抗氧化剂NAC的作用后的指标检测 | 第70页 |
| ·细胞周期的检测 | 第70-71页 |
| ·p53抑制剂(PFT-a)作用后的指标检测 | 第71页 |
| ·统计学分析 | 第71-72页 |
| ·结果 | 第72-84页 |
| ·Cr(Ⅵ)诱导ROS的生成 | 第72-75页 |
| ·Cr(Ⅵ)诱导p53的生成 | 第75-76页 |
| ·Cr(Ⅵ)对肝细胞细胞周期的影响 | 第76-81页 |
| ·Cr(Ⅵ)对NF-kB表达的影响 | 第81-82页 |
| ·Cr(Ⅵ)对AKT通路的影响 | 第82-84页 |
| ·讨论 | 第84-87页 |
| 第四章 Cr(Ⅵ)诱导的肝细胞线粒体呼吸链功能紊乱在早衰中的作用研究 | 第87-104页 |
| ·材料 | 第87-88页 |
| ·细胞系 | 第87页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第87页 |
| ·主要仪器 | 第87页 |
| ·western一抗以及二抗 | 第87-88页 |
| ·方法 | 第88-92页 |
| ·细胞衰老检测 | 第88-89页 |
| ·衰老细胞细胞周期分析 | 第89页 |
| ·衰老细胞百分比的检测 | 第89-90页 |
| ·衰老细胞中ROS生成的检测 | 第90页 |
| ·衰老细胞中线粒体超氧化物生成的检测 | 第90页 |
| ·NAC预处理后Cr(Ⅵ)对细胞早衰的影响 | 第90页 |
| ·p53 shRNA干扰技术 | 第90-92页 |
| ·p53 shRNA的脂质体转染 | 第92页 |
| ·统计学分析 | 第92页 |
| ·结果 | 第92-101页 |
| ·Cr(Ⅵ)诱导肝细胞早衰 | 第92-94页 |
| ·Cr(Ⅵ)诱导的肝细胞早衰与凋亡的鉴别 | 第94页 |
| ·Cr(Ⅵ)诱导早衰细胞中ROS生成 | 第94-96页 |
| ·ROS在Cr(Ⅵ)诱导细胞早衰中的作用 | 第96-98页 |
| ·p53在Cr(Ⅵ)诱导细胞早衰中的作用 | 第98-101页 |
| ·讨论 | 第101-104页 |
| 结论 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-114页 |
| 综述 | 第114-123页 |
| 参考文献 | 第120-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第124页 |
