| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 中英文名词及缩写 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 第一部分 实时定量PCR检测血中脆弱拟杆菌DNA的方法学及临床标本验证 | 第15-62页 |
| 一、实验材料 | 第16-19页 |
| (一) 主要仪器 | 第16页 |
| (二) 试剂及耗材 | 第16-17页 |
| (三) 菌种来源 | 第17-18页 |
| (四) 标本采集 | 第18-19页 |
| 二、实验方法 | 第19-37页 |
| (一) 特异性引物及TaqMan探针设计 | 第19页 |
| (二) LB(Luria-Bertain)培养基的制备 | 第19-20页 |
| (三) 基因组DNA提取 | 第20-22页 |
| (四) 引物有效性及特异性验证 | 第22-23页 |
| (五) 探针有效性及特异性验证 | 第23-24页 |
| (六) 标准品质粒的制备 | 第24-29页 |
| (七) 实时定量PCR引物和探针浓度优化 | 第29-32页 |
| (八) 实时定量PCR反应体系建立及实验流程 | 第32-35页 |
| (九) 检测限及灵敏度和特异度测试 | 第35页 |
| (十) 标准曲线建立 | 第35页 |
| (十一) 仪器准确性及重复性测试 | 第35页 |
| (十二) 模拟血标本中细菌DNA提取效率测定 | 第35页 |
| (十三) 模拟标本存放稳定性监测 | 第35-36页 |
| (十四) RQ-PCR对临床标本脆弱拟杆菌的检测 | 第36页 |
| (十五) 统计学处理 | 第36-37页 |
| 三、实验结果 | 第37-56页 |
| (一) 特异性引物及TaqMan探针序列 | 第37页 |
| (二) 引物和探针特异性验证 | 第37-38页 |
| (三) 菌落PCR | 第38-39页 |
| (四) 测序 | 第39-43页 |
| (五) 比对 | 第43-46页 |
| (六) 质粒电泳 | 第46页 |
| (七) 质粒PCR | 第46-47页 |
| (八) 质粒DNA拷贝数的换算 | 第47页 |
| (九) 实时定量PCR引物和探针浓度优化 | 第47-50页 |
| (十) 检测限及灵敏度和特异度测定 | 第50-51页 |
| (十一) 标准曲线线性范围 | 第51-53页 |
| (十二) 仪器的准确性及重复性 | 第53页 |
| (十三) 血标本中细菌DNA提取效率 | 第53-54页 |
| (十四) 储存标本的稳定性 | 第54页 |
| (十五) 临床标本检测结果 | 第54-56页 |
| 四、讨论 | 第56-62页 |
| 第二部分 实时定量PCR检测外科发热患者静脉血中脆弱拟杆菌并与细菌培养结果的对照研究 | 第62-72页 |
| 一、实验材料 | 第62-64页 |
| (一) 主要仪器 | 第62-63页 |
| (二) 试剂及耗材 | 第63页 |
| (三) 标本采集 | 第63-64页 |
| 二、实验方法 | 第64-65页 |
| (一) 患者血标本厌氧菌培养 | 第64页 |
| (二) 临床血标本细菌基因组DNA提取 | 第64页 |
| (三) 检测限和灵敏度、特异性的确定 | 第64页 |
| (四) 健康成年人全血基因组的检测 | 第64页 |
| (五) 临床标本检测 | 第64页 |
| (六) 统计学处理 | 第64-65页 |
| 三、实验结果 | 第65-69页 |
| (一) 健康成年人血标本检测结果 | 第65页 |
| (二) 发热外科患者血标本实时定量PCR检测结果 | 第65-68页 |
| (三) 外科发热患者厌氧菌血培养结果 | 第68-69页 |
| 四、讨论 | 第69-72页 |
| 第三部分 实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB培养基和血中对抗生素的敏感性 | 第72-84页 |
| 一、实验材料 | 第73-74页 |
| (一) 主要仪器 | 第73页 |
| (二) 试剂及耗材 | 第73-74页 |
| (三) 菌种来源 | 第74页 |
| 二、实验方法 | 第74-77页 |
| (一) LB液体培养基配制 | 第74页 |
| (二) 抗生素的稀释 | 第74页 |
| (三) LB液体培养基中药物敏感性试验 | 第74-75页 |
| (四) 健康人全血中药物敏感性试验 | 第75页 |
| (五) 基因组DNA的提取 | 第75页 |
| (六) 大肠埃希菌引物和探针、标准品 | 第75页 |
| (七) 实时定量PCR反应体系 | 第75-77页 |
| 三、实验结果 | 第77-81页 |
| (一) LB液体培养基中大肠埃希菌抗生素药物敏感性试验 | 第77-80页 |
| (二) 健康人全血中大肠埃希菌抗生素药物敏感性试验 | 第80-81页 |
| 四、讨论 | 第81-84页 |
| 文献综述 | 第84-95页 |
| 参考文献 | 第95-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 个人简历 | 第101页 |
