| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-14页 |
| 前言 | 第14-21页 |
| 第一部分 质粒DNA的扩增、提取和纯化 | 第21-34页 |
| 1 仪器与试药 | 第22-25页 |
| ·商品试剂盒与主要试剂 | 第22页 |
| ·细菌培养基 | 第22页 |
| ·主要溶液的配制 | 第22-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24-25页 |
| 2 实验方法与结果 | 第25-29页 |
| ·质粒DNA的扩增 | 第25-26页 |
| ·质粒DNA的提取和纯化 | 第26-27页 |
| ·质粒DNA的产量 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA的纯度分析 | 第28-29页 |
| 3 小结和讨论 | 第29-34页 |
| ·基因治疗对质粒载体的要求 | 第29-30页 |
| ·大规模分离纯化质粒DNA的关键操作 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA的分光光度法测定 | 第31页 |
| ·基因治疗用质粒DNA的质量评价指标 | 第31-34页 |
| 第二部分 载基因纳米脂质体制备工艺的研究 | 第34-58页 |
| 1 仪器和试剂 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·实验仪器 | 第35页 |
| 2 实验方法与结果 | 第35-53页 |
| ·质粒DNA含量测定方法的建立 | 第35-38页 |
| ·载基因纳米脂质体的制备 | 第38-53页 |
| 3 小结和讨论 | 第53-58页 |
| ·脂质体基因传递系统 | 第53页 |
| ·荧光分光光度法测定DNA的含量 | 第53-54页 |
| ·载基因纳米脂质体的制备方法 | 第54-58页 |
| 第三部分 载基因纳米脂质体体外细胞学试验研究 | 第58-85页 |
| 1 仪器与试剂 | 第58-61页 |
| ·试剂盒与主要试剂 | 第58-59页 |
| ·细胞株 | 第59页 |
| ·细胞培养基及主要溶液的配制 | 第59-60页 |
| ·实验仪器 | 第60-61页 |
| 2 实验方法 | 第61-67页 |
| ·细胞复苏 | 第61页 |
| ·细胞传代 | 第61页 |
| ·细胞转染 | 第61-62页 |
| ·X-gal染色观察pORF-LacZ的转染效果 | 第62页 |
| ·pORF-LacZ的转染率测定 | 第62-64页 |
| ·pEYFP-C1-P27转染效果的观察 | 第64-65页 |
| ·pEYFP-C1-p27转染率的测定 | 第65页 |
| ·空白纳米脂质体的细胞毒性研究 | 第65页 |
| ·p27-DNLs对肿瘤细胞的生长抑制试验 | 第65-66页 |
| ·p27-DNLs对肿瘤细胞细胞周期的影响 | 第66页 |
| ·p27-DNLs对肿瘤细胞凋亡的影响 | 第66页 |
| ·统计学分析 | 第66-67页 |
| 3 实验结果 | 第67-78页 |
| ·β-半乳糖苷酶在肿瘤细胞中的表达 | 第67-70页 |
| ·EYFP在肿瘤细胞中的表达 | 第70-72页 |
| ·空白脂质体的细胞毒性评价 | 第72-73页 |
| ·p27-DNLs对肿瘤细胞的生长抑制作用 | 第73-74页 |
| ·p27-DNLs对肿瘤细胞细胞周期的影响 | 第74页 |
| ·p27-DNLs对肿瘤细胞凋亡的影响 | 第74-78页 |
| 4 小结和讨论 | 第78-85页 |
| ·报告基因 | 第78-79页 |
| ·DNLs能够介导报告基因在肿瘤细胞中表达 | 第79-81页 |
| ·BCA法测定蛋白的原理 | 第81页 |
| ·四唑盐(MTT)比色法 | 第81-82页 |
| ·空白脂质体对细胞无明显毒性 | 第82页 |
| ·p27-DNLs可以明显抑制肿瘤细胞的生长 | 第82-85页 |
| 第四部分 载基因纳米脂质体冻干粉针剂的研究 | 第85-98页 |
| 1 仪器和试剂 | 第85-86页 |
| ·主要仪器 | 第85-86页 |
| ·主要试剂 | 第86页 |
| 2 方法与结果 | 第86-95页 |
| ·DNLS冻干针剂的处方及制备工艺研究 | 第87-90页 |
| ·DNLs冻干粉针剂质量评价 | 第90-95页 |
| 3 小结与讨论 | 第95-98页 |
| ·冷冻干燥后的DNLs | 第95页 |
| ·冷冻干燥技术 | 第95-96页 |
| ·冻干保护剂的作用 | 第96页 |
| ·DNLs冻干粉针剂中DNA的生物活性 | 第96-98页 |
| 第五部分 p27-DNLs冻干粉针剂及p27-LPDs冻干粉针剂对肺转移肿瘤小鼠的治疗实验研究 | 第98-127页 |
| 1 仪器与试药 | 第99-101页 |
| ·实验设备 | 第99-100页 |
| ·主要试剂 | 第100页 |
| ·实验动物 | 第100-101页 |
| ·细胞株 | 第101页 |
| 2 实验方法与结果 | 第101-109页 |
| ·pEYFP-C1-p27-DNLs冻干粉针剂在小鼠体内的表达分布研究 | 第101页 |
| ·p27-LPDs冻干粉针剂的制备 | 第101-102页 |
| ·小鼠肺转移肿瘤模型的建立 | 第102页 |
| ·预试 | 第102-103页 |
| ·给药 | 第103-106页 |
| ·荷瘤小鼠的治疗效果观察 | 第106页 |
| ·抗结肠癌肺转移作用观察 | 第106页 |
| ·组织学及病理学观察 | 第106-107页 |
| ·p27-DNLs冻干粉针剂及p27-LPDs冻干粉针剂体内抗肿瘤作用的初步机理探讨 | 第107-108页 |
| ·统计学分析 | 第108-109页 |
| 3 实验结果 | 第109-119页 |
| ·EYFP在小鼠体内的表达分布 | 第109-111页 |
| ·p27-DNLs冻干粉针剂及p27-LPDs冻干粉针剂可以抑制结肠癌肺转移及肿瘤的生长 | 第111-116页 |
| ·p27-DNLs冻干粉针剂及p27-LPDs冻干粉针剂可以延长荷瘤小鼠的生存周期 | 第116-117页 |
| ·免疫组化检测肺组织中p27~(kip1)的表达 | 第117页 |
| ·p27-DNLs冻干粉针剂及p27-LPDs冻干粉针剂联合小剂量顺铂副作用的观察 | 第117-119页 |
| 4 小结和讨论 | 第119-127页 |
| ·DNLs可以介导外源基因经静脉注射在小鼠体内表达 | 第119-120页 |
| ·小鼠肺转移肿瘤模型的建立 | 第120页 |
| ·p27~(kip1)体内基因治疗 | 第120-121页 |
| ·p27-DNLs冻干粉针剂及p27-LPDs冻干粉针剂联合小剂量顺铂治疗小鼠肺转移肿瘤 | 第121-123页 |
| ·免疫组织化学检测目的蛋白在小鼠体内的表达 | 第123-127页 |
| 结论 | 第127-129页 |
| 综述 | 第129-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
| 作者简介 | 第148-150页 |
