| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-29页 |
| 1 植物转基因研究的发展及现状 | 第13-14页 |
| 2 根癌农杆菌介导的植物转基因 | 第14-28页 |
| ·概述 | 第14-16页 |
| ·根癌农杆菌的研究简史 | 第14-15页 |
| ·根癌农杆菌的生物学特性 | 第15页 |
| ·根癌农杆菌Ti质粒的结构与功能 | 第15-16页 |
| ·植物转基因研究中常用的农杆菌菌株及特性 | 第16页 |
| ·T-DNA导入植物基因组的分子机理 | 第16-19页 |
| ·农杆菌对受体的识别 | 第17页 |
| ·农杆菌附着到受体细胞 | 第17页 |
| ·诱导和启动毒性区基因表达 | 第17-18页 |
| ·类似接合孔复合体的合成和装配 | 第18页 |
| ·T-DNA的加工和转运 | 第18-19页 |
| ·T-DNA的整合 | 第19页 |
| ·农杆菌T-DNA质粒的改造及载体构建 | 第19-20页 |
| ·T-DNA转移的影响因素 | 第20-22页 |
| ·农杆菌菌株 | 第20页 |
| ·农杆菌菌株高侵染活力的生长时期 | 第20页 |
| ·基因活化的诱导物 | 第20-21页 |
| ·外植体的类型和生理状态 | 第21页 |
| ·外植体的预培养 | 第21页 |
| ·外植体的接种及共培养 | 第21-22页 |
| ·转化细胞的选择培养和高频再生 | 第22-23页 |
| ·转化细胞的选择 | 第22-23页 |
| ·高效转化体再生 | 第23页 |
| ·外源基因整合和表达鉴定 | 第23页 |
| ·外源基因的表达及提高外源基因表达的工程策略 | 第23-27页 |
| ·高等植物核基因的分子结构特点 | 第24页 |
| ·高等植物基因表达调控特点 | 第24-26页 |
| ·提高外源基因表达的策略 | 第26-27页 |
| ·转基因植物的遗传特性 | 第27-28页 |
| ·转基因植物中外源DNA整合的遗传效应 | 第27-28页 |
| ·转基因的稳定性 | 第28页 |
| 3 本研究的目的意义 | 第28-29页 |
| 第二章 农杆菌介导的牡丹江8号高效转基因体系的建立 | 第29-40页 |
| 1 前言 | 第29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-33页 |
| ·试验材料 | 第29-30页 |
| ·牡丹江8号组培体系的建立 | 第30页 |
| ·试验所用的培养基(见表2.1) | 第30页 |
| ·潮霉素(Hn)有效筛选浓度的试验 | 第30页 |
| ·愈伤组织生理状态与农杆菌侵染 | 第30页 |
| ·不同预培养和共培养培养基与农杆菌侵染 | 第30-31页 |
| ·农杆菌悬浮培养基的比较试验 | 第31页 |
| ·农杆菌处理菌液浓度与其侵染 | 第31页 |
| ·共培养温度与农杆菌侵染 | 第31页 |
| ·程序化转基因体系的建立及其有效性的验证试验 | 第31页 |
| ·GUS基因表达的组织化学法检测 | 第31页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第31-33页 |
| ·DNA抽提 | 第31-32页 |
| ·PCR分析: | 第32页 |
| ·Southern杂交分析(参照本实验室实验手册) | 第32-33页 |
| ·转基因植株后代的遗传分析 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-38页 |
| ·牡丹江8号愈伤组织对潮霉素的敏感性 | 第33-34页 |
| ·愈伤组织生理状态对根癌农杆菌侵染的影响 | 第34页 |
| ·预培养和共培养培养基对农杆菌侵染的影响 | 第34-35页 |
| ·农杆菌悬浮培养基 | 第35页 |
| ·不同浓度的农杆菌对愈伤组织侵染的影响 | 第35页 |
| ·共培养温度对农杆菌侵染力的影响 | 第35-36页 |
| ·农杆菌介导的牡丹江8号转基因操作体系及体系效率的验证 | 第36-37页 |
| ·转基因植株的GUS组织化学染色分析和PCR鉴定 | 第37页 |
| ·转基因植株Southern杂交分析 | 第37-38页 |
| ·转基因植株后代遗传分析 | 第38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| ·选择试剂的种类和使用浓度的选择 | 第38-39页 |
| ·农杆菌菌液悬浮培养基 | 第39页 |
| ·报告基因瞬时表达与抗性愈伤率 | 第39页 |
| ·关于转基因体系的建立 | 第39页 |
| ·牡丹江8号农杆菌介导的遗传转化体系的适用性 | 第39-40页 |
| 第三章 籼稻农杆菌介导的基因转化体系的建立 | 第40-52页 |
| 1 前言 | 第40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-44页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·农杆菌菌株和转化载体 | 第40-41页 |
| ·基本培养基及其组成 | 第41页 |
| ·愈伤组织诱导 | 第41页 |
| ·籼稻愈伤组织继代培养基的筛选 | 第41-43页 |
| ·碳源筛选 | 第41-42页 |
| ·继代培养基无机成分筛选试验 | 第42页 |
| ·培养基比较试验 | 第42页 |
| ·J_3培养基连续继代的愈伤分化活力的测定。 | 第42-43页 |
| ·籼稻高效分化培养基的筛选及其比较试验 | 第43页 |
| ·潮霉素敏感性试验 | 第43页 |
| ·农杆菌介导的基因转化 | 第43-44页 |
| ·转基因植株的GUS表达分析及DNA分子检测 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-49页 |
| ·继代培养基碳源的筛选 | 第44页 |
| ·继代培养基的筛选及培养基比较试验 | 第44-45页 |
| ·J_3培养基连续继代的愈伤组织分代活力测定 | 第45-46页 |
| ·籼稻高效分化培养基的筛选及其比较 | 第46页 |
| ·潮霉素敏感性试验 | 第46-47页 |
| ·农杆菌介导的基因转化 | 第47-48页 |
| ·抗性愈伤组织的获得 | 第47页 |
| ·抗性愈伤组织再生 | 第47-48页 |
| ·转基因植株的GUS染色和DNA分子检测 | 第48-49页 |
| ·GUS染色和PCR分析 | 第48-49页 |
| ·Southern杂交分析 | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| ·籼稻组织培养体系 | 第49-50页 |
| ·籼稻继代和分化培养 | 第50页 |
| ·植物组织培养及植物遗传转化过程中的定量问题 | 第50页 |
| ·农杆菌介导的籼稻基因转化 | 第50-52页 |
| 第四章 利用农杆菌介导法将叶片衰老抑制基因P_(SAG12)-IPT转化水稻品种明恢63 | 第52-60页 |
| 1 前言 | 第52-54页 |
| ·叶片衰老生物学 | 第52页 |
| ·叶片衰老的调控 | 第52-54页 |
| ·常规方法 | 第52-53页 |
| ·分子遗传学方法 | 第53页 |
| ·自我调控衰老抑制系统策略 | 第53-54页 |
| ·研究目的 | 第54页 |
| 2 材料与方法 | 第54-55页 |
| ·植物材料、农杆菌菌株和转化载体 | 第54页 |
| ·愈伤组织诱导、继代。基因转化和植株再生 | 第54页 |
| ·转基因植株的GUS表达检测 | 第54页 |
| ·小量DNA抽提和PCR检测 | 第54-55页 |
| ·大量DNA抽提和Southern杂交 | 第55页 |
| ·R_0转化再生植株的种植 | 第55页 |
| ·R_1转基因株系种植和目标转基因株系选择 | 第55页 |
| ·R_2转基因阳性纯合株系的选择及小区比较试验 | 第55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-58页 |
| ·基因转化与植株再生 | 第55-56页 |
| ·抗性再生植株的PCR和GUS检测 | 第56页 |
| ·转化植株的Southern杂交验证 | 第56页 |
| ·R_1代目标转基因株系的选择 | 第56-57页 |
| ·R_2代目标转基因纯合株系的筛选 | 第57页 |
| ·R_2代纯合转基因株系的生长后期持绿性 | 第57-58页 |
| ·R_2转基因纯合株系的农艺性状表现 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| ·自我调控叶片衰老抑制基因P_(SAG12)-IPT在水稻中的表现 | 第58-59页 |
| ·自我调控叶片衰老系统及其应用潜力 | 第59-60页 |
| 第五章 农杆菌浸种法转化水稻品种珍汕97B | 第60-71页 |
| 1 前言 | 第60页 |
| 2 材料与方法 | 第60-63页 |
| ·试验材料 | 第60-61页 |
| ·农杆菌浸种法转化水稻的参数 | 第61-62页 |
| ·农杆菌菌液浓度的影响 | 第61页 |
| ·菌液pH值对农杆菌侵染效率的影响 | 第61页 |
| ·共培养时间对农杆菌侵染效率的影响 | 第61页 |
| ·真空抽吸对转化效率的影响 | 第61页 |
| ·AS对农杆菌侵染的影响 | 第61-62页 |
| ·共培养温度对农杆菌侵染的影响 | 第62页 |
| ·农杆菌浸泡种子法将反义Wx基因导入珍汕97B | 第62-63页 |
| ·珍汕97B种子对潮霉素的敏感性试验 | 第62页 |
| ·T_0代转基因单株的初步筛选 | 第62页 |
| ·T_1代潮霉素抗性株系的PCR和Southern杂交验证 | 第62页 |
| ·T_1代阳性转基因植株收获种子的直链淀粉含量测定 | 第62-63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-68页 |
| ·农杆菌浸种法转化水稻的参数 | 第63-65页 |
| ·浸种所用的农杆菌菌液浓度 | 第63页 |
| ·菌液pH值 | 第63页 |
| ·共培养时间 | 第63-64页 |
| ·真空抽吸 | 第64页 |
| ·AS(乙酰丁香酮)的添加 | 第64-65页 |
| ·共培养温度 | 第65页 |
| ·农杆菌浸种法转化体系的优化程序 | 第65页 |
| ·珍汕97B发芽种子对潮霉素敏感性 | 第65-66页 |
| ·阳性抗性个体的筛选 | 第66页 |
| ·T_1代潮霉素阳性抗性株系的PCR和Southern分子检测 | 第66-67页 |
| ·T_1代转基因植株收获种子的直链淀粉含量测定 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-71页 |
| ·关于农杆菌浸种法参数优化试验 | 第69页 |
| ·关于农杆菌菌液浸泡种子起始阶段的真空抽吸 | 第69页 |
| ·关于共培养过程中是否加AS的问题 | 第69-70页 |
| ·关于转基因植株的筛选 | 第70-71页 |
| 第六章 作物转基因研究中的问题及思考 | 第71-79页 |
| 1 转基因作物的验证 | 第71页 |
| 2 作物转基因应具备的条件 | 第71-72页 |
| 3 转基因的遗难物种及其限制因素 | 第72页 |
| 4 转化体的获得 | 第72-76页 |
| ·组织培养 | 第73页 |
| ·基因转移 | 第73-74页 |
| ·转化体的选择 | 第74-75页 |
| ·转基因的表达 | 第75页 |
| ·外源基因的插入整合 | 第75-76页 |
| 5 作物转基因研究和发展中的非技术性的问题 | 第76-77页 |
| ·环境管理和大众认知 | 第76页 |
| ·知识产权 | 第76-77页 |
| 6 未来作物转基因研究和发展的要求与方向 | 第77-79页 |
| ·转化效率 | 第77页 |
| ·有用的和纯粹的转化效率 | 第77页 |
| ·遗传损害 | 第77-78页 |
| ·理想的和模式化的转化系统 | 第78页 |
| ·转基因、育种与遗传多样性 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
