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粘帚霉菌寄生核盘菌菌核相关酶类的活性分析及其cDNA消减文库的构建

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-11页
第一章 文献综述第11-20页
 1 核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de bary)及其生物防治研究进展第11页
   ·核盘菌的寄主范围及危害第11页
   ·核盘菌的生物防治第11页
 2 菌寄生菌及其作用机制的研究进展第11-14页
   ·菌寄生菌第11-12页
   ·菌寄生菌作用机制的研究第12-14页
 3 常用差异基因筛选方法第14-18页
   ·表达序列标签(Expressed Sequence Tag,EST)技术第14-15页
   ·mRNA 差异显示(m RNA Differential Display,DD)技术第15-16页
   ·代表性差异分析法(Representational difference analysis,RDA)第16页
   ·DNA 微阵列技术(DNA microarray)第16-17页
   ·抑制消减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)第17-18页
 4 本研究的目的及意义第18-20页
第二章 粘帚霉菌寄生核盘菌菌核的能力及其代谢产物分析第20-30页
 1 材料与方法第20-24页
   ·材料第20-21页
   ·方法第21-24页
     ·菌核的制备第21页
     ·菌株活化第21页
     ·不同粘帚霉菌株对核盘菌菌核寄生能力的测定第21-22页
     ·粘帚霉菌株寄生大豆核盘菌菌核代谢产物分析第22-23页
     ·不同粘帚霉菌株对核盘菌菌核的寄生能力与细胞壁降解酶活性的相关性分析第23页
     ·粘帚霉HL-1-1 对核盘菌菌核的降解能力与细胞壁降解酶活性的相关性分析第23-24页
 2 结果与分析第24-28页
   ·粘帚霉对核盘菌菌核寄生能力的比较与分析第24页
   ·粘帚霉寄生大豆核盘菌菌核代谢产物分析第24-26页
     ·代谢产物抑菌活性的测定第24-25页
     ·代谢产物细胞壁降解酶的活性第25-26页
   ·不同粘帚霉菌株寄生能力、代谢产物抑菌活性、代谢产物中几丁质酶及葡聚糖酶活性之间的相关分析第26-27页
   ·培养时间对粘帚霉HL-1-1 代谢产物中细胞壁降解酶活性的影响第27-28页
     ·葡聚糖酶和几丁质酶活性的检测第27-28页
     ·粘帚霉HL-1-1 对核盘菌菌核的降解程度与细胞壁降解酶活性的相关性分析第28页
 3 本章小结第28-30页
第三章 应用SSH 技术构建粘帚霉HL-1-1 寄生核盘菌菌核前后CDNA 消减文库第30-46页
 1 材料与方法第30-42页
   ·材料第30-31页
   ·方法第31-42页
     ·实验器皿处理第31-32页
     ·菌株的培养第32页
     ·总RNA 的提取第32页
     ·总RNA 产量和质量的检测第32-33页
     ·mRNA 纯化第33页
     ·乙醇法浓缩mRNA第33页
     ·应用SSH 技术分离差异表达基因片断第33-40页
     ·差异表达序列片段的回收第40-41页
     ·差异表达序列片段的克隆第41页
     ·PCR 法鉴定重组质粒第41页
     ·差异表达序列片段的测序及同源性分析第41-42页
 2 结果与分析第42-46页
   ·总RNA 及mRNA 的检测第42页
   ·消化效率检测第42-43页
   ·连接效率分析第43页
   ·抑制性PCR 分析消减杂交效率第43-44页
   ·PCR 法初步筛选重组质粒第44页
   ·差异表达片断的序列测定及其同源性分析第44-46页
第四章 反式NORTHERN 杂交检测CDNA 消减文库有效性第46-50页
 1 材料与方法第46-48页
   ·材料第46-47页
   ·方法第47-48页
     ·探针的制备第47页
     ·预杂交第47页
     ·杂交第47-48页
     ·洗膜第48页
     ·免疫检测第48页
 2 结果与分析第48-50页
第五章 讨论第50-52页
 1 关于细胞壁降解酶类第50-51页
 2 关于粘帚霉寄生核盘菌菌核CDNA 消减文库第51-52页
结论第52-53页
参考文献第53-60页
附录第60-64页
致谢第64-65页
作者简历第65页

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