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棉花体胚同步发生及相关基因表达和蛋白磷酸化分析

摘要第1-11页
Abstract第11-16页
缩略语表第16-17页
1 前言第17-41页
   ·植物体细胞胚发生的研究概况及其意义第17-18页
   ·植物体细胞胚发生的影响因素第18-25页
     ·植物本身的因素第18-19页
     ·培养基成分第19-23页
       ·基本培养基第19-20页
       ·外源激素第20-23页
     ·培养方式第23页
     ·培养条件第23-25页
   ·植物体细胞胚发生的同步化调控第25-27页
   ·植物体细胞胚发生的细胞生物学研究第27-29页
   ·植物体细胞胚发生的蛋白质研究第29-34页
     ·植物体细胞胚发生过程中蛋白质和氨基酸的代谢动态第29-30页
     ·植物体细胞胚发生过程中特异蛋白的研究第30-31页
     ·植物体细胞胚发生过程中蛋白质组学的研究第31-32页
     ·植物体细胞胚发生过程中蛋白质磷酸化和蛋白激酶的研究第32-34页
   ·植物体细胞胚发生相关基因及其功能的研究第34-38页
     ·植物体胚发生相关特异基因的克隆与表达第34-36页
     ·植物体细胞胚发生过程中的转录谱和相关基因的差异表达第36-38页
   ·棉花体细胞胚发生机理的研究概况第38-40页
   ·本项研究的目的与意义第40-41页
2 棉花高效体细胞胚发生及其同步化调控第41-53页
   ·材料与方法第42-44页
     ·供试材料第42-43页
     ·棉花愈伤组织的诱导和继代培养第43页
     ·棉花体细胞胚发生培养基的优化第43-44页
     ·棉花体细胞胚发育的同步化控制第44页
   ·结果与分析第44-48页
     ·陆地棉品种Coker201胚性培养物在继代培养过程中的表现第44-45页
     ·棉花体细胞胚发生培养基的优化第45-46页
     ·陆地棉品种Coker201体细胞胚发生的不同培养方式的比较第46-47页
     ·陆地棉品种Coker201体细胞胚发生的同步调控效果第47-48页
   ·讨论第48-53页
   ·结论第53页
3 棉花体细胞胚发生过程的组织细胞学观察第53-69页
   ·材料与方法第54-56页
     ·愈伤组织的诱导和继代培养第54-55页
     ·胚性愈伤组织的悬浮培养第55页
     ·胚性细胞团的固体培养第55页
     ·石蜡切片制样与观察第55-56页
   ·结果与分析第56-65页
     ·愈伤组织诱导和分化过程的组织细胞学观察第56-59页
     ·体细胞胚发生过程及其组织细胞学观察第59-65页
       ·体细胞胚发生和发育的过程第59-60页
       ·体细胞胚发生过程中的组织细胞学观察第60-63页
       ·体细胞胚发育过程中的组织细胞学观察第63-65页
   ·讨论第65-68页
     ·关 于胚性愈伤组织的形成第65-66页
     ·关于体细胞胚的起源与发生部位第66-67页
     ·关于体细胞胚的极性建立和器官分化第67-68页
   ·结论第68-69页
4 棉花体细胞胚发生过程中相关基因的表达第69-102页
   ·材料与方法第70-74页
     ·植物材料第70-71页
     ·基因来源和PCR引物的设计第71-73页
     ·RNA提取及纯化第73页
       ·RNA提取第73页
       ·无RNase的DNase处理第73页
       ·RNA定量和完整性检测第73页
     ·RT-PCR分析第73-74页
       ·cDNA逆转录第73-74页
       ·cDNA检测及基因的RT-PCR分析第74页
     ·实时定量PCR分析(qRT-PCR)第74页
   ·结果与分析第74-85页
     ·所选基因的表达概况第74-75页
     ·几个转录因子和后转录因子基因的表达分析第75-77页
     ·几个脂质转运蛋白基因和相关基因的表达分析第77-78页
     ·几类主要信号分子基因的表达分析第78-81页
     ·2个细胞壁相关蛋白基因的表达分析第81-82页
     ·几个生理代谢途径相关酶基因的表达分析第82-85页
   ·讨论第85-100页
     ·关于供试基因的选择和表达第85-86页
     ·转录因子基因在体细胞胚和合子胚发生过程中的差异表达第86-92页
     ·脂质转运蛋白基因在体细胞胚和合子胚发生过程中的差异表达第92-93页
     ·几类主要信号分子基因在体细胞胚和合子胚发生过程中的差异表达第93-95页
     ·细胞壁相关蛋白基因在体细胞胚和合子胚发生过程中的差异表达第95-96页
     ·生理代谢途径相关酶基因在体细胞胚和合子胚发生过程中的差异表达第96-99页
     ·体细胞胚发生过程中基因网络的复杂性第99-100页
   ·结论第100-102页
5 棉花体细胞胚发生过程中蛋白质磷酸化和酪蛋白激酶活性分析第102-116页
   ·材料与方法第103-106页
     ·植物材料第103-104页
     ·蛋白质提取第104-105页
     ·SDS-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)第105页
     ·染色和照相第105页
     ·体外磷酸化分析第105-106页
     ·酪蛋白激酶活性检测第106页
   ·结果与分析第106-111页
     ·体细胞胚发育过程中可溶性蛋白质含量的变化第106-107页
     ·体细胞胚发育过程中蛋白质表达谱分析第107-108页
     ·体细胞胚发育过程中蛋白质磷酸化分析第108-109页
       ·体细胞胚发育过程中蛋白质的自磷酸化和体外磷酸化第108-109页
       ·磷酸酶抑制剂对蛋白质体外磷酸化表达谱的影响第109页
     ·体细胞胚发育过程中酪蛋白激酶活性的分析第109-111页
       ·肝磷脂对体细胞胚发生过程中各阶段蛋白质磷酸化的影响第109-110页
       ·体细胞胚发生过程中各阶段蛋白激酶对酪蛋白磷酸化的影响第110页
       ·体细胞胚发生过程中各阶段胶内激酶分析第110-111页
   ·讨论第111-115页
     ·关于磷酸化蛋白的检测第111-112页
     ·体细胞胚发生过程中蛋白质的表达及其磷酸化第112-114页
     ·体细胞胚发生过程中酪蛋白激酶的活性第114-115页
   ·结论第115-116页
6 棉花胚性培养物蛋白质双向电泳技术体系的建立第116-130页
   ·材料和方法第116-120页
     ·供试材料及处理第116-117页
     ·化学试剂第117页
     ·蛋白质的提取第117-118页
     ·蛋白质的溶解第118页
     ·SDS-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)第118页
     ·双向电泳第118-119页
     ·染色和图像扫描第119-120页
       ·考马斯亮蓝染色第119页
       ·银染色第119-120页
   ·结果与分析第120-125页
     ·不同方法提取的蛋白质的2-DE图谱的比较第120页
     ·4种提取方法的总蛋白产量及其SDS-PAGE分析第120-123页
     ·不同蛋白质裂解液的SDS-PAGE和2-DE图谱的比较第123-124页
     ·不同的考马斯亮蓝染色和银染色方法的染色效果的比较第124-125页
   ·讨论第125-129页
   ·结论第129-130页
参考文献第130-161页
致谢第161-162页
附录第162页

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