线性基因表达框直接转化体系的优化和瞬时表达
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-23页 |
| ·常用的植物转基因技术及其发展和存在的问题 | 第12-16页 |
| ·常用的植物转基因技术 | 第12-15页 |
| ·线性片段转化的研究进展 | 第15页 |
| ·转基因技术的发展和安全隐患 | 第15-16页 |
| ·报告基因在植物转基因研究中的应用 | 第16-19页 |
| ·瞬时表达系统的研究意义 | 第19-21页 |
| ·本实验研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 2 直接转化辅助因子的筛选与优化 | 第23-33页 |
| ·实验材料和试剂 | 第23-25页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·主要试剂和培养基 | 第23-25页 |
| ·实验方法 | 第25-29页 |
| ·SmGFP和GUS基因植物表达载体的获得 | 第25-27页 |
| ·SmGFP和GUS基因转化植物材料 | 第27-29页 |
| ·转基因材料瞬时表达检测 | 第29页 |
| ·实验结果与分析 | 第29-31页 |
| ·农杆菌表达载体的获得 | 第29页 |
| ·渗透压的测定结果 | 第29-30页 |
| ·转基因材料瞬时表达检测结果 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 3 线性基因表达框转化方法优化 | 第33-46页 |
| ·实验材料和试剂 | 第33页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·主要试剂和培养基 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-38页 |
| ·引物的合成 | 第33-34页 |
| ·质粒的提取 | 第34页 |
| ·线性基因表达框的制备 | 第34-36页 |
| ·线性基因表达框转化方法的优化 | 第36页 |
| ·线性基因表达框转化洋葱表皮 | 第36-37页 |
| ·GUS基因的组织化学染色 | 第37页 |
| ·洋葱表皮细胞核的提取 | 第37页 |
| ·荧光观察和流式细胞检测 | 第37-38页 |
| ·实验结果与分析 | 第38-44页 |
| ·线性基因表达框的制备 | 第38页 |
| ·线性基因表达框转化方法的优化结果 | 第38-39页 |
| ·SmGFP线性基因表达框的瞬时表达 | 第39-40页 |
| ·GUS基因的瞬时表达 | 第40-41页 |
| ·外源荧光标记DNA片段在细胞中的定位 | 第41-43页 |
| ·流式细胞检测 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 4 线性基因表达框转化烟草 | 第46-58页 |
| ·实验材料和试剂 | 第46-47页 |
| ·实验材料 | 第46页 |
| ·主要试剂和培养基 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-52页 |
| ·线性基因表达框的制备 | 第47页 |
| ·烟草愈伤组织的诱导 | 第47页 |
| ·烟草愈伤组织的转化 | 第47-48页 |
| ·SmGFP在烟草愈伤组织中的瞬时表达 | 第48页 |
| ·转smGFP烟草的分子检测 | 第48-49页 |
| ·PCR检测 | 第49页 |
| ·点杂交检测 | 第49-50页 |
| ·烟草RNA的提取 | 第50-51页 |
| ·RT-PCR检测 | 第51-52页 |
| ·实验结果与分析 | 第52-55页 |
| ·烟草愈伤的诱导结果 | 第52-53页 |
| ·转化愈伤组织的瞬时表达 | 第53-54页 |
| ·转化烟草的PCR检测 | 第54页 |
| ·转化烟草点杂交检测结果 | 第54-55页 |
| ·烟草总RNA的提取结果 | 第55页 |
| ·烟草RT-PCR检测结果 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 5 结论与展望 | 第58-60页 |
| ·结论 | 第58-59页 |
| ·展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 附录A 培养基配方 | 第64-65页 |
| 附录B 电泳用DNA Marker | 第65-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
