三角涡虫酪蛋白激酶2α亚基和丝裂原活化蛋白激酶的cDNA文库克隆及生物信息学分析
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第1章 前言 | 第9-19页 |
| 1 蛋白激酶综述 | 第9-12页 |
| ·蛋白激酶的发现、研究历史以及定义 | 第9-10页 |
| ·蛋白激酶的分类 | 第10页 |
| ·蛋白激酶的结构 | 第10-12页 |
| ·蛋白激酶细胞定位 | 第12页 |
| 2 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) | 第12-13页 |
| 3 酪蛋白激酶2(CK2) | 第13-14页 |
| 4 三角涡虫概述 | 第14-15页 |
| ·涡虫形态分类学 | 第15页 |
| ·涡虫的生活习性 | 第15页 |
| 5 cDNA文库的构建 | 第15-19页 |
| ·cDNA文库的分类 | 第16页 |
| ·全长cDNA文库的构建 | 第16页 |
| ·SMART技术原理 | 第16-17页 |
| ·DSN均一化技术 | 第17-18页 |
| ·构建cDNA文库的基本步骤 | 第18-19页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第19-33页 |
| 1 实验材料 | 第19-20页 |
| ·采集三角涡虫 | 第19页 |
| ·培养三角涡虫 | 第19-20页 |
| 2 实验主要仪器 | 第20-21页 |
| 3 实验试剂 | 第21-22页 |
| 4 实验方法 | 第22-28页 |
| ·三角涡虫总RNA的制备 | 第22-23页 |
| ·cDNA的合成与文库的构建 | 第23-27页 |
| ·回收目的片段 | 第27页 |
| ·产物的连接和转化 | 第27-28页 |
| 5 文库的鉴定 | 第28-31页 |
| ·三角涡虫总RNA的制备 | 第28页 |
| ·cDNA第一链的获得 | 第28页 |
| ·cDNA质量的检测 | 第28-29页 |
| ·文库克隆的检测 | 第29-31页 |
| 6 生物信息学分析工具 | 第31-33页 |
| ·核酸序列分析 | 第31页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第31-33页 |
| 第3章 实验结果 | 第33-39页 |
| 1 检测总RNA的质量 | 第33-34页 |
| ·检测吸光度 | 第33页 |
| ·总RNA的凝胶电泳检测 | 第33-34页 |
| 2 cDNA质量的检测 | 第34页 |
| 3 均一化结果 | 第34-35页 |
| 4 cDNA文库的质量 | 第35-37页 |
| ·cDNA文库的库容量 | 第35-36页 |
| ·cDNA文库的滴度 | 第36页 |
| ·连接产物的菌落PCR鉴定 | 第36-37页 |
| 5 cDNA文库的鉴定 | 第37-39页 |
| ·RNA提取的凝胶电泳检测 | 第37页 |
| ·cDNA质量的检测 | 第37-38页 |
| ·文库克隆MAPK的检测 | 第38-39页 |
| 第4章 MAPK和CK2A亚基的生物信息学分析 | 第39-59页 |
| 1 开放性阅读框分析 | 第39-41页 |
| ·丝裂原活化蛋白激酶的开放性阅读框分析 | 第39页 |
| ·酪蛋白激酶2α亚基的开放性阅读框分析 | 第39-41页 |
| 2 CDD分析 | 第41-42页 |
| 3 氨基酸序列同源性分析 | 第42-43页 |
| 4 蛋白质理化性质分析 | 第43-50页 |
| 5 疏水性分析 | 第50-51页 |
| 6 信号肽预测 | 第51-52页 |
| 7 亚细胞定位分析 | 第52页 |
| 8 蛋白质跨膜结构域分析 | 第52-53页 |
| 9 蛋白质二级结构预测 | 第53-54页 |
| 10 蛋白质三级结构预测 | 第54页 |
| 11 磷酸化位点预测 | 第54-56页 |
| 12 系统发育分析 | 第56-59页 |
| 第5章 讨论 | 第59-61页 |
| 第6章 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第71页 |
