| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-43页 |
| 1 半纤维素 | 第12-17页 |
| ·半纤维素的结构 | 第12-14页 |
| ·半纤维素的水解 | 第14-17页 |
| ·半纤维素的预处理 | 第15页 |
| ·半纤维素的酶解 | 第15-17页 |
| 2 木聚糖及木聚糖酶 | 第17-34页 |
| ·木聚糖及其化学结构 | 第17-18页 |
| ·木聚糖酶 | 第18-20页 |
| ·木聚糖酶的分类 | 第20-24页 |
| ·木聚糖酶的理化特性 | 第24页 |
| ·木聚糖酶的分子结构 | 第24-28页 |
| ·木聚糖酶的作用机制 | 第28-30页 |
| ·极端木聚糖酶 | 第30-33页 |
| ·木聚糖酶基因的克隆和表达 | 第33-34页 |
| 3 木聚糖酶的应用 | 第34-36页 |
| ·木聚糖酶在食品、医药行业中的应用 | 第34-35页 |
| ·木聚糖酶在饲料工业中的应用 | 第35页 |
| ·木聚糖酶在造纸工业中的应用 | 第35页 |
| ·木聚糖酶在其它领域中的应用 | 第35-36页 |
| 4 富集培养物 | 第36-37页 |
| 5 宏基因组及宏基因组文库 | 第37-42页 |
| ·环境微生物宏基因组DNA的提取和纯化 | 第37-38页 |
| ·宏基因组文库的构建 | 第38页 |
| ·宏基因组文库的筛选 | 第38-40页 |
| ·基于功能基因表达的筛选方法 | 第39页 |
| ·基于化合物结构水平的筛选方法 | 第39页 |
| ·基于序列特异性的筛选方法 | 第39-40页 |
| ·宏基因组文库的测序 | 第40-42页 |
| 6 本研究的目的与意义 | 第42-43页 |
| 第二章 材料与方法 | 第43-65页 |
| ·材料 | 第43-47页 |
| ·环境样品 | 第43页 |
| ·富集培养物的构建 | 第43页 |
| ·菌株和质粒 | 第43-44页 |
| ·菌种保存 | 第44-45页 |
| ·培养基、培养条件和抗生素 | 第45-46页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| ·培养条件 | 第46页 |
| ·抗生素 | 第46页 |
| ·常规试剂、溶液和缓冲液 | 第46-47页 |
| ·方法 | 第47-65页 |
| ·质粒提取 | 第47页 |
| ·DNA的酶切、连接和电泳 | 第47页 |
| ·电透析洗脱法回收DNA片段 | 第47-48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒的转化 | 第48-50页 |
| ·氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第48-49页 |
| ·氯化铷法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第49页 |
| ·转化反应 | 第49-50页 |
| ·富集培养物宏基因组DNA的提取 | 第50-51页 |
| ·直接提取法 | 第50页 |
| ·间接提取法 | 第50-51页 |
| ·富集培养物的宏基因组DNA的纯化 | 第51页 |
| ·能降解稻草和滤纸的富集培养物宏基因组文库的构建 | 第51-53页 |
| ·文库中表达纤维素酶活性克隆的筛选 | 第53页 |
| ·文库中木聚糖酶基因的克隆 | 第53-54页 |
| ·GenBank索引号 | 第54页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A的序列分析 | 第54页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A的系统发育分析 | 第54-56页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A的分子建模 | 第56页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A的能量预测分析 | 第56-57页 |
| ·PCR引物设计与基因扩增 | 第57页 |
| ·基因的表达与检测 | 第57页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第57-59页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳所需的溶液和试剂 | 第57-58页 |
| ·SDS-PAGE电泳过程 | 第58-59页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第59-60页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第60-61页 |
| ·活性亚克隆表达外切葡聚糖酶的酶谱分析 | 第61页 |
| ·木聚糖酶的酶活测定 | 第61-64页 |
| ·木聚糖酶酶活测定 | 第62-63页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A对p-NPC的酶活力测定 | 第63-64页 |
| ·糖类的薄层层析 | 第64-65页 |
| 第三章 结果与分析 | 第65-97页 |
| ·能降解稻草和滤纸的富集培养物的宏基因组DNA的提取和纯化 | 第65-67页 |
| ·能降解稻草和滤纸的富集培养物的构建 | 第65页 |
| ·能降解稻草和滤纸的富集培养物宏基因组DNA的提取和纯化 | 第65-67页 |
| ·宏基因组文库的构建 | 第67-68页 |
| ·富集培养物EC709宏基因组文库的筛选 | 第68-71页 |
| ·内切葡聚糖酶活性克隆的筛选及转化验证 | 第68-70页 |
| ·对4-MUC有活性的阳性克隆的筛选及转化验证 | 第70-71页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活性克隆的筛选 | 第71页 |
| ·活性克隆11210的纤维素酶基因的克隆及序列分析 | 第71-74页 |
| ·对4-MUC有活性的克隆70981的基因的克隆及序列分析 | 第74-76页 |
| ·木聚糖酶基因的克隆及序列分析 | 第76-84页 |
| ·对4-MUC有活性的克隆3621的基因的克隆及序列分析 | 第76-78页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A与糖苷水解酶家族10的其它木聚糖酶的序列比对分析 | 第78-79页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A的系统发育分析 | 第79-81页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A的结构功能域预测 | 第81-82页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A的分子建模 | 第82-83页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A的结构能量预测 | 第83-84页 |
| ·木聚糖酶基因umxyn10A的表达 | 第84-87页 |
| ·重组木聚糖酶Umxyn10A的酶谱分析 | 第87-88页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A的纯化 | 第88-89页 |
| ·重组木聚糖酶Umxyn10A的酶学特性分析 | 第89-97页 |
| ·pH值对木聚糖酶Umxyn10A酶活力的影响 | 第89-90页 |
| ·温度对木聚糖酶Umxyn10A酶活力的影响 | 第90-91页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A的pH耐受性实验 | 第91-92页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A的热稳定性 | 第92-93页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A的酶反应动力学常数Km和Vmax测定 | 第93-94页 |
| ·金属离子、螯合剂、表面活性剂对木聚糖酶Umxyn10A酶活力的影响 | 第94-95页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A的底物特异性分析 | 第95页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A对纤维寡糖的作用方式分析 | 第95-97页 |
| 第四章 讨论 | 第97-103页 |
| ·能降解稻草和滤纸的富集培养物的构建 | 第97-98页 |
| ·宏基因组DNA的提取及其文库的构建、筛选 | 第98页 |
| ·基因umgs1A、ufncel9E的序列分析 | 第98-99页 |
| ·木聚糖酶Umxyn10A的序列分析 | 第99-101页 |
| ·重组木聚糖酶Umxyn10A的酶学特性分析 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 附录:参与的科研、取得的成果和发表的文章 | 第117-118页 |
