| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-33页 |
| ·ZwA的性质 | 第13-18页 |
| ·ZwA产生菌 | 第13-14页 |
| ·ZwA的活性 | 第14-18页 |
| ·ZwA的抑菌活性 | 第14-17页 |
| ·ZwA的杀虫增效活性 | 第17页 |
| ·ZwA的作用机制 | 第17-18页 |
| ·抗生素合成途径 | 第18-26页 |
| ·抗生素的作用方式 | 第18-19页 |
| ·抗生素的合成途径 | 第19-26页 |
| ·聚酮及聚酮合成酶 | 第19-20页 |
| ·非核糖体肽及非核糖体肽合成酶 | 第20-22页 |
| ·抗生素聚酮合成酶-非核糖体肽合成酶杂合合成途径 | 第22-26页 |
| ·聚酮/非核糖体肽杂合途径 | 第25页 |
| ·非核糖体肽/聚酮杂合途径 | 第25-26页 |
| ·ZwA的生物合成研究基础 | 第26-31页 |
| ·ZwA抗性基因zmaR | 第27页 |
| ·与ZwA合成相关的16kb DNA片段及基于此的ZwA合成推测 | 第27-29页 |
| ·ZwA生物合成研究中待解决的问题 | 第29-31页 |
| ·ZwA的产量达不到规模化生产的要求 | 第30页 |
| ·ZwA的生物合成基因簇尚不完整、合成途径尚不完善 | 第30-31页 |
| ·苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1520简介 | 第31-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-44页 |
| ·实验材料 | 第33-38页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第33-37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·试剂和仪器 | 第37-38页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·仪器 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-44页 |
| ·DNA常规操作 | 第38-41页 |
| ·质粒的制备与纯化 | 第38页 |
| ·DNA的体外重组操作 | 第38-40页 |
| ·大肠杆菌DH10B电转化感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·连接与转化 | 第40-41页 |
| ·文库的筛选与保存 | 第41页 |
| ·分子杂交 | 第41页 |
| ·Southern杂交 | 第41页 |
| ·Western杂交 | 第41页 |
| ·ZwA的分离与检测 | 第41-42页 |
| ·ZwA活性平板检测 | 第41-42页 |
| ·ZwA的高效液相色谱检测 | 第42页 |
| ·蛋白质的表达、纯化与活性检测 | 第42-44页 |
| ·腺苷酰化结构域ZWAA的超量表达与纯化 | 第42页 |
| ·腺苷酰化结构域ZWAA的活性检测 | 第42-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-69页 |
| ·苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1520基因组BAC文库的构建 | 第44-46页 |
| ·苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1520文库的构建 | 第44-45页 |
| ·苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1520质粒的调查 | 第45-46页 |
| ·ZwA合成基因簇 | 第46-50页 |
| ·覆盖ZwA合成基因簇的重叠联合群的建立 | 第46-47页 |
| ·苏云金芽胞杆菌中ZwA合成基因簇的克隆与分析 | 第47-49页 |
| ·ZwA合成基因簇的定位 | 第49页 |
| ·苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1520与蜡样芽胞杆菌UW85中ZwA合成基因簇部分序列的比较 | 第49-50页 |
| ·ZwA生物合成途径的研究 | 第50-66页 |
| ·前体物Dap | 第50-63页 |
| ·前体物Dap的合成途径假设 | 第50-51页 |
| ·前体物Dap合成基因zwa5A的插入突变研究 | 第51-57页 |
| ·腺苷酰化结构域ZWAA的表达与活性检测 | 第57-63页 |
| ·ZwA生物合成途径推导 | 第63-66页 |
| ·前体物氨基丙二酰-ACP、羟基丙二酰-ACP和Dap的从头合成 | 第63页 |
| ·前体物的组装 | 第63-64页 |
| ·ZwA骨架的修饰 | 第64-66页 |
| ·导入外源基因对ZwA产量的影响 | 第66-69页 |
| ·编码基因aiiA可以在ZwA产生菌中成功表达 | 第67页 |
| ·高丝氨酸内酯酶编码基因aiiA的表达不影响宿主菌ZwA的产量 | 第67-69页 |
| 4 讨论 | 第69-75页 |
| ·ZwA合成基因簇中的功能未知基因 | 第69-72页 |
| ·丙二酰辅酶A-酰基载体蛋白转酰基酶基因zwa4D | 第69-70页 |
| ·磺酸单加氧酶基因zwa3C | 第70-71页 |
| ·非核糖体肽合成酶基因orf4、orf5 | 第71-72页 |
| ·ZwA的合成调控 | 第72页 |
| ·ZwA的跨膜转运以及ZwA产生菌株的自身免疫保护 | 第72-74页 |
| ·通过组合生物合成手段对ZwA进行改造的展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 附录:已发表和待发表论文 | 第84页 |
