| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略语表 | 第14-16页 |
| 第1章 前言 | 第16-32页 |
| 1 立题背景 | 第16-17页 |
| 2 文献综述 | 第17-31页 |
| ·造血干细胞的分化 | 第17-18页 |
| ·细胞凋亡 | 第18-19页 |
| ·细胞周期 | 第19-20页 |
| ·TMEM66基因的研究进展 | 第20-21页 |
| ·TMEM66基因的发现 | 第20页 |
| ·TMEM66基因的结构 | 第20-21页 |
| ·TMEM66基因的功能 | 第21页 |
| ·慢病毒载体及其应用 | 第21-31页 |
| ·慢病毒的结构 | 第22-23页 |
| ·慢病毒的生活周期 | 第23-24页 |
| ·慢病毒载体研究 | 第24-31页 |
| ·慢病毒载体的一般特点 | 第24页 |
| ·HIV-1慢病毒载体系统 | 第24-26页 |
| ·慢病毒载体的应用 | 第26-30页 |
| ·问题与展望 | 第30-31页 |
| 3 研究目的和意义 | 第31-32页 |
| 第2章 TMEM66基因功能预测 | 第32-39页 |
| ·前言 | 第32页 |
| ·材料与方法 | 第32-33页 |
| ·主要数据库 | 第32页 |
| ·功能域分析 | 第32页 |
| ·跨膜预测 | 第32-33页 |
| ·活性位点预测 | 第33页 |
| ·表达信息整理 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-37页 |
| ·功能域分析结果 | 第33-34页 |
| ·跨膜预测结果 | 第34页 |
| ·结构模式图 | 第34-35页 |
| ·活性位点预测结果 | 第35页 |
| ·表达信息整理结果 | 第35-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第3章 TMEM66基因分子水平研究 | 第39-58页 |
| ·前言 | 第39页 |
| ·材料与方法 | 第39-47页 |
| ·材料 | 第39-42页 |
| ·DNA样品 | 第39-40页 |
| ·RNA样品 | 第40页 |
| ·载体和菌株 | 第40页 |
| ·试剂盒及酶 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40-41页 |
| ·主要试剂的配制 | 第41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41-42页 |
| ·主要分子生物学软件 | 第42页 |
| ·主要数据库 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-47页 |
| ·猪TMEM66基因克隆 | 第42-44页 |
| ·猪TMEM66基因定位 | 第44页 |
| ·猪TMEM66基因表达谱分析 | 第44-45页 |
| ·PCR-RFLP检测猪TMEM66基因多态性(SNP) | 第45-46页 |
| ·人TMEM66基因表达规律研究 | 第46-47页 |
| ·包含DUF1183功能域蛋白序列比对及进化树绘制 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-53页 |
| ·猪TMEM66基因CDs全长 | 第47页 |
| ·猪TMEM66基因的染色体定位 | 第47-48页 |
| ·猪TMEM66基因组织表达谱分析结果 | 第48-49页 |
| ·猪TMEM66基因多态性 | 第49页 |
| ·等位基因群体多样性 | 第49-50页 |
| ·不同组织细胞表达分析结果 | 第50页 |
| ·人TMEM66三个转录本蛋白序列对比 | 第50-51页 |
| ·U937诱导分化过程中TMEM66基因表达规律 | 第51-52页 |
| ·包含DUF1183功能域蛋白序列比对及进化树绘制结果 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-57页 |
| ·关于猪基因电子克隆 | 第53-54页 |
| ·关于基因定位 | 第54页 |
| ·关于SNP检测及等位基因频率分析 | 第54页 |
| ·关于猪TMEM66基因表达分布 | 第54-55页 |
| ·关于人TMEM66表达研究 | 第55-56页 |
| ·人TMEM66基因三个转录本分析 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 第4章 TMEM66基因细胞水平研究 | 第58-72页 |
| ·前言 | 第58页 |
| ·材料与方法 | 第58-64页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·载体 | 第58页 |
| ·菌株和细胞系 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58页 |
| ·主要试剂的配制 | 第58-59页 |
| ·主要仪器 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-64页 |
| ·TMEM66和TMEM66T3亚细胞定位载体构建 | 第59-60页 |
| ·细胞转染 | 第60-61页 |
| ·过表达人TMEM66的慢病毒(LV66)构建 | 第61-64页 |
| ·慢病毒感染U937细胞 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-69页 |
| ·空载体pEGFP-N1亚细胞定位结果 | 第64-65页 |
| ·人TMEM66、TMEM66T3亚细胞定位结果 | 第65-66页 |
| ·IFIT5亚细胞定位结果 | 第66页 |
| ·慢病毒滴度检测结果 | 第66-67页 |
| ·TMEM66蛋白过表达检测 | 第67页 |
| ·LV66感染U937细胞 | 第67-68页 |
| ·感染效率检测 | 第67-68页 |
| ·TMEM66过表达检测结果 | 第68页 |
| ·流式细胞仪检测结果 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| ·亚细胞定位结果分析 | 第69页 |
| ·关于慢病毒过表达载体 | 第69-70页 |
| ·TMEM66基因对细胞周期的影响分析 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第5章 TMEM66基因转基因小鼠构建 | 第72-83页 |
| ·前言 | 第72页 |
| ·材料与方法 | 第72-78页 |
| ·材料 | 第72-75页 |
| ·DNA样品 | 第72页 |
| ·载体 | 第72-73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·主要试剂的配制 | 第73-75页 |
| ·主要仪器设备 | 第75页 |
| ·方法 | 第75-78页 |
| ·转基因小鼠构建 | 第75-76页 |
| ·转基因小鼠检测 | 第76-78页 |
| ·传代研究 | 第78页 |
| ·结果 | 第78-81页 |
| ·显微注射的DNA片段 | 第78-79页 |
| ·PCR检测结果 | 第79页 |
| ·Southern Blot结果 | 第79-80页 |
| ·反向PCR扩增结果 | 第80-81页 |
| ·小鼠传代结果 | 第81页 |
| ·讨论 | 第81-82页 |
| ·转基因效率分析 | 第81页 |
| ·转基因小鼠检测方法选择 | 第81-82页 |
| ·转基因片段整合方式以及位点分析 | 第82页 |
| ·小结 | 第82-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 特色与创新之处 | 第84-85页 |
| 进一步研究方向 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-96页 |
| 附录1 本研究中所用的引物 | 第96-97页 |
| 附录2 人TMEM66三个转录本蛋白序列 | 第97-98页 |
| 附录3 研究生期间所作的其它工作 | 第98-101页 |
| 附录4 攻读学位期间发表论文 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
