| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 氯代芳香烃的微生物降解 | 第7-23页 |
| ·氯苯类化合物的微生物降解途径 | 第7-13页 |
| ·氯苯氧化脱氯途径 | 第7-11页 |
| ·氯苯经氯邻苯二酚邻位开环脱氯机制 | 第8-11页 |
| ·氯苯经氯邻苯二酚间位开环脱氯机制 | 第11页 |
| ·氯苯类化合物的还原脱氯机制 | 第11-13页 |
| ·一氯苯代谢途径的相关酶 | 第13-17页 |
| ·氯苯双加氧酶(chlorobenzene dioxygenase) | 第13-16页 |
| ·顺式双醇脱氢酶(cis-chlorobenzene dihydrodiol dehydrogenase) | 第16页 |
| ·氯邻苯二酚-1,2-双加氧酶(chlorocatechol-1,2-dioxygenase) | 第16-17页 |
| ·氯邻苯二酚-2,3-双加氧酶(chlorocatechol-2,3-dioxygenase) | 第17页 |
| ·氯苯代谢的相关基因簇 | 第17-21页 |
| ·甲苯,氯苯降解菌如何克服甲苯,氯苯的毒性 | 第21-23页 |
| 第二章 氯苯降解菌Pandoraea sp. MCB032氯苯降解机理的研究 | 第23-51页 |
| 1.材料和方法 | 第23-32页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·药品及试剂 | 第23-24页 |
| ·菌株 | 第24-25页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第25页 |
| ·仪器与设备 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-32页 |
| ·培养条件 | 第25-26页 |
| ·生长试验,氯离子测定,及底物范围测定 | 第26页 |
| ·质粒提取及strain MCB032染色体DNA制备 | 第26页 |
| ·氯苯代谢基因序列测定及分析 | 第26-27页 |
| ·基因组步移(Genome walking)及序列分析 | 第27-29页 |
| ·菌落PCR获得cbsAaAbAcAd(cbsA),cbsB,clcA基因片段 | 第29页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第29页 |
| ·重组质粒的构建与转化 | 第29-30页 |
| ·阳性克隆的验证 | 第30页 |
| ·E. coli Rosetta(pZWJC2)[cbsAaAbAcAd], E. coli Rosetta(pZWJC3)[cbsB]的诱导表达及SDS-PAGE | 第30页 |
| ·CbsA和CbsB的甲苯生物转化试验及HPLC检测 | 第30-31页 |
| ·细胞粗提物(chlorocatechol-1,2-dioxygenase粗酶)的制备 | 第31页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第31页 |
| ·酶活性的测定 | 第31-32页 |
| 2.结果与分析 | 第32-47页 |
| ·MCB032的氯苯降解特性 | 第32-33页 |
| ·MCB032所含质粒分析 | 第33-34页 |
| ·MCB032底物生长实验 | 第34页 |
| ·MCB032中氯苯降解基因的克隆以及序列分析 | 第34-39页 |
| ·cbsA,cbsB基因的克隆 | 第39-41页 |
| ·clcA基因的克隆 | 第41-42页 |
| ·CbsA(CbsAaAbAcAd)和CbsB在E. coli中的功能表达 | 第42-45页 |
| ·chlorocatechol-1,2-dioxygenase(ClcA)的酶活测定 | 第45-47页 |
| 3.讨论 | 第47-49页 |
| 4.工作小结及下一步设想 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
