| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 引言 | 第16-27页 |
| 1. 产气荚膜梭菌简介 | 第16-19页 |
| 2.流行情况 | 第19-22页 |
| 3.四种主要致死性毒素的研究进展 | 第22-24页 |
| 4.研究的目的和意义 | 第24-27页 |
| 实验一产气荚膜梭菌的分离和初步鉴定 | 第27-34页 |
| 1 材料 | 第27-28页 |
| ·样品 | 第27页 |
| ·试验动物 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·染色液 | 第27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-29页 |
| ·显微镜检查 | 第28页 |
| ·细菌增菌培养 | 第28页 |
| ·细菌分离培养 | 第28页 |
| ·菌体形态和运动性观察 | 第28页 |
| ·生化试验 | 第28-29页 |
| ·毒素检查 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-34页 |
| ·镜检结果 | 第29页 |
| ·增菌培养结果 | 第29页 |
| ·细菌分离培养 | 第29-30页 |
| ·菌体形态和运动性观察 | 第30页 |
| ·生化试验结果 | 第30-32页 |
| ·毒素检查结果 | 第32-33页 |
| ·产气荚膜梭菌菌种保存 | 第33-34页 |
| 实验二 产气荚膜梭菌外毒素蛋白纯化中硫酸铵沉淀法的改进 | 第34-37页 |
| 1 材料 | 第34-35页 |
| ·菌种 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 2 方法 | 第35页 |
| ·培养液的制取 | 第35页 |
| ·不同饱和度的硫酸铵粗提外毒素蛋白 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-37页 |
| 实验三 SDS-PAGE 方法鉴定产气荚膜梭菌的毒素型 | 第37-49页 |
| 1 材料 | 第37-39页 |
| ·菌种 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38页 |
| ·试验动物 | 第38-39页 |
| 2 方法 | 第39-40页 |
| ·培养液的制取 | 第39页 |
| ·产气荚膜梭菌外毒素的粗提 | 第39页 |
| ·产气荚膜梭菌外毒素的纯化 | 第39-40页 |
| ·透析脱盐 | 第39页 |
| ·SephadexG-200 分子筛层析 | 第39-40页 |
| ·产气荚膜梭菌外毒素的 SDS-PAGE 电泳 | 第40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-49页 |
| ·产气荚膜梭菌外毒素的粗提 | 第40-41页 |
| ·产气荚膜梭菌外毒素的纯化（SephadexG-200 分子筛层析） | 第41-46页 |
| ·产气荚膜梭菌外毒素 SDS-PAGE 电泳 | 第46-49页 |
| 实验四 Multi-PCR 和 ELISA 对产气荚膜梭菌毒素型别的检测 | 第49-57页 |
| 1 材料 | 第49-50页 |
| ·菌种 | 第49页 |
| ·标准菌株 | 第49页 |
| ·检测菌株 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49-50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·PCR 反应试剂 | 第50页 |
| ·试验所用其它试剂的配制 | 第50页 |
| ·标准抗 C(β)-血清和抗 D(e)-血清 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-54页 |
| ·Multi-PCR 方法 | 第50-51页 |
| ·Multi-PCR 引物设计 | 第50-51页 |
| ·模板DNA 的制备 | 第51页 |
| ·Multi-PCR 扩增 | 第51页 |
| ·ELISA 方法 | 第51-54页 |
| ·毒素的制取 | 第51-52页 |
| ·抗毒素抗体 | 第52页 |
| ·ELISA 检测毒素（Sandwich-Technik） | 第52-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-57页 |
| ·不同地区各饲养场样品检测结果 | 第54页 |
| ·多重 PCR 基因分型结果 | 第54-55页 |
| ·标准抗血清和样品毒素工作浓度 | 第55页 |
| ·ELISA 检测结果 | 第55页 |
| ·产气荚膜梭菌外毒素检测结果的差异性 | 第55-57页 |
| ·SDS-PAGE 与ELISA 两种方法对德国牛舍环境气源性产气荚膜梭菌分离株外毒素检测结果的比较 | 第55-56页 |
| ·SDS-PAGE与multi-PCR两种方法对山东省地区产气荚膜梭菌分离株外毒素检测结果的比较 | 第56-57页 |
| 实验五 产气荚膜梭菌外毒素致病性的研究及类毒素疫苗的制备 | 第57-64页 |
| 1 材料 | 第57-58页 |
| ·菌种 | 第57页 |
| ·标准菌株 | 第57页 |
| ·检测样品 | 第57页 |
| ·培养基 | 第57页 |
| ·仪器和设备 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·试验动物 | 第57-58页 |
| 2 方法 | 第58-59页 |
| ·培养液的制取 | 第58页 |
| ·外毒素的制备 | 第58页 |
| ·产气荚膜梭菌菌液的制备 | 第58页 |
| ·毒素致病性的研究 | 第58页 |
| ·坏死性试验 | 第58页 |
| ·致死性试验 | 第58页 |
| ·致病性试验 | 第58页 |
| ·半数致死量的测定 | 第58-59页 |
| ·病理组织学检查 | 第59页 |
| ·类毒素疫苗的制备 | 第59页 |
| ·毒素的灭活 | 第59页 |
| ·灭活效果检验 | 第59页 |
| ·制备类毒素疫苗 | 第59页 |
| ·类毒素疫苗的检验 | 第59页 |
| ·安全性试验 | 第59页 |
| ·免疫效力试验 | 第59页 |
| 3 结果 | 第59-64页 |
| ·坏死性试验结果 | 第59-60页 |
| ·致死性试验结果 | 第60页 |
| ·致病性试验结果 | 第60-61页 |
| ·半数致死量的测定结果 | 第61页 |
| ·产气荚膜梭菌攻毒小鼠的病理组织学变化 | 第61-62页 |
| ·毒素灭活试验结果 | 第62页 |
| ·类毒素疫苗安全性试验结果 | 第62页 |
| ·免疫效力试验结果 | 第62-64页 |
| 讨论 | 第64-71页 |
| 1 产气荚膜梭菌的分离和初步鉴定 | 第64-65页 |
| 2 产气荚膜梭菌外毒素蛋白纯化中硫酸铵沉淀法的改进 | 第65页 |
| 3 产气荚膜梭菌α、β、ε毒素的提取和毒素型的鉴定 | 第65-68页 |
| ·试验条件的优化 | 第65-67页 |
| ·产气荚膜梭菌病的流行控制 | 第67-68页 |
| 4 ELISA、Multi-PCR 和SDS-PAGE 方法对产气荚膜梭菌毒素型别的研究 | 第68-69页 |
| 5 产气荚膜梭菌外毒素致病性的研究及类毒素疫苗的制备 | 第69-71页 |
| ·产气荚膜梭菌外毒素的制备 | 第69页 |
| ·产气荚膜梭菌外毒素的灭活 | 第69-70页 |
| ·产气荚膜梭菌分离株致病性研究 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 附图 | 第81-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第87页 |
