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叶酸修饰PAMAM树形分子介导靶向恶性脑胶质瘤基因转染及体内外脑瘤抑制研究

摘要第1-3页
ABSTRACT第3-7页
第一章 绪论第7-24页
   ·引言第7-9页
   ·阳离子高分子基因载体第9-16页
     ·阳离子高分子基因载体的分类第9-15页
     ·聚阳离子基因载体介导的基因转染的一般过程第15-16页
   ·Starburst PAMAM dendrimers 基因载体第16-20页
     ·Starburst PAMAM dendrimers 作基因载体的优势第17-20页
     ·Starburst PAMAM dendrimers 作基因载体的影响因素第20页
   ·聚阳离子基因传递系统的功能化第20-22页
     ·含有靶向性组分的高分子基因传递系统第21页
     ·含有内涵体(endosome)破膜组分的高分子基因传递系统第21-22页
     ·含有核定位传导信号组分的高分子基因传递系统第22页
   ·论文工作的提出第22-24页
第二章 PAMAM及FA-PAMAM/寡核苷酸的制备和表征第24-33页
   ·引言第24-25页
   ·实验部分第25-27页
     ·仪器和试剂第25-26页
     ·FA-PAMAM的合成与表征第26-27页
   ·结果与讨论第27-32页
     ·FA-PAMAM的表征第27-28页
     ·电泳结合实验结果第28-29页
     ·FA-PAMAM/ODN和PAMAM/ODN的透射电镜形貌观察第29-32页
   ·本章结论第32-33页
第三章 PAMAM介导反义寡聚核苷酸抑制U251 人脑胶第33-46页
   ·前言第33页
   ·实验部分第33-40页
     ·仪器和试剂第33-35页
     ·靶向EGFR的人源反义寡核苷酸的靶序列的选择与合成第35页
     ·细胞培养及实验分组第35页
     ·基因转染第35-36页
     ·半定量逆转录-聚合酶反应(semiquantitative-reverse transcription-polymerase chain reaction, SQ-RT-PCR)检测EGFR的表达第36-39页
     ·免疫荧光第39页
     ·MTT法(噻唑兰比色分析法)检测基因治疗后的细胞增殖活性第39页
     ·统计学方法第39-40页
   ·结果第40-44页
     ·细胞转染实验结果第40-41页
     ·转染效果的检测第41-42页
     ·细胞免疫荧光检测结果第42-43页
     ·细胞毒性检测结果第43-44页
   ·讨论第44-45页
   ·本章小结第45-46页
第四章 FA-PAMAM介导反义寡聚核苷酸抑制C6 鼠脑胶第46-61页
   ·前言第46页
   ·实验部分第46-52页
     ·仪器和试剂第46页
     ·靶向EGFR的鼠源反义寡核苷酸的靶序列的选择与合成第46-47页
     ·细胞培养及实验分组第47页
     ·基因转染及转染率的测定第47页
     ·mRNA水平的表达检测比较不同转染剂的转染效果第47页
     ·MTT法(噻唑兰比色分析法)检测基因治疗后的细胞增殖活性第47-48页
     ·流式细胞技术仪分析细胞周期第48-49页
     ·Anexin V检测细胞凋亡第49页
     ·Western blot 检测EGFR表达第49-52页
   ·结果第52-58页
     ·载体系统转染率的测定结果第52-53页
     ·RT-PCR 检测基因治疗系统治疗后目的基因的表达,比较不同转染剂的转染效果第53-54页
     ·Western blot检测基因治疗后目的蛋白表达的变化第54页
     ·基因治疗后,细胞生物学特性的改变第54-58页
   ·讨论第58-59页
   ·本章小结第59-61页
第五章 FA-PAMAM/ASODN原位注射治疗C6 鼠胶质瘤的体内研究第61-79页
   ·前言第61页
   ·实验部分第61-66页
     ·实验材料及设备第61-62页
     ·大鼠脑胶质瘤模型的建立第62-63页
     ·实验动物分组及组织标本采集第63页
     ·核磁共振(MRI)检测第63页
     ·动态观察动物情况第63-64页
     ·免疫组织化学检测第64-65页
     ·原位细胞凋亡的检测第65-66页
     ·统计学处理第66页
   ·结果与讨论第66-74页
     ·一般情况与生存期观察第66-68页
     ·MRI动态检测动物模型的生长状况第68-69页
     ·HE染色第69-71页
     ·EGFR免疫组化检测第71页
     ·PCNA免疫组化检测第71-72页
     ·MMP2、MMP9 免疫组化检测第72-73页
     ·TUNEL凋亡检测(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)第73-74页
   ·讨论第74-77页
   ·本章小结第77-79页
第六章 FA-PAMAM/ASODN股静脉注射基因投递C6 荷瘤鼠的体内分布研究第79-85页
   ·前言第79页
   ·实验部分第79-80页
     ·实验材料及设备第79-80页
     ·不同载体系统进行基因投递时体内分布第80页
   ·结果第80-83页
   ·讨论第83-84页
   ·本章小结第84-85页
全文结论第85-87页
参考文献第87-100页
发表论文和参加科研情况说明第100-101页
致谢第101页

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