产酸克雷伯氏菌HP1可溶性氢酶的分离纯化及特性的研究
| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-32页 |
| ·氢酶的发现和氢酶的分类 | 第12-13页 |
| ·氢酶的发现 | 第12页 |
| ·氢酶的分类 | 第12-13页 |
| ·氢酶的分离纯化 | 第13-17页 |
| ·菌体破碎方法 | 第13-14页 |
| ·可溶性氢酶的分离 | 第14页 |
| ·膜结合态氢酶的分离 | 第14页 |
| ·可溶性氢酶与膜结合态氢酶的纯化 | 第14-15页 |
| ·氢酶的活性检测 | 第15-16页 |
| ·氧对氢酶分离纯化的影响 | 第16-17页 |
| ·氢酶的结构及其催化机理 | 第17-23页 |
| ·氢酶的结构 | 第17-20页 |
| ·[NiFe]氢酶的结构 | 第17-18页 |
| ·[Fe]氢酶的结构 | 第18-20页 |
| ·氢酶的催化机理 | 第20-23页 |
| ·电子、质子和H_2 传递通道 | 第20-21页 |
| ·氢酶的氧化还原状态及催化反应过程 | 第21-23页 |
| ·氢酶基因的结构及其氢酶的表达调控 | 第23-28页 |
| ·氢酶的结构基因 | 第23-28页 |
| ·[NiFe]氢酶的结构基因 | 第23-26页 |
| ·[Fe]氢酶的结构基因 | 第26-28页 |
| ·氢酶基因的表达调控 | 第28页 |
| ·氢酶的成熟 | 第28-30页 |
| ·本论文研究的内容 | 第30-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-40页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-40页 |
| ·菌体培养 | 第33-34页 |
| ·粗酶液的制备 | 第34页 |
| ·氢酶的分离纯化 | 第34-35页 |
| ·饱和硫酸铵沉淀 | 第34页 |
| ·Sephadex G-25 脱盐及酶液的浓缩 | 第34页 |
| ·DEAE-Sepharose F.F.柱层析 | 第34-35页 |
| ·Sephacryl S-200 柱层析 | 第35页 |
| ·TSK-DEAE 柱层析 | 第35页 |
| ·氢酶活性的检测 | 第35-36页 |
| ·氢电极检测系统 | 第35页 |
| ·氢电极检测系统的活化和校正 | 第35-36页 |
| ·氢酶活性的计算 | 第36页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第36页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）及染色 | 第36-39页 |
| ·Native-PAGE | 第36页 |
| ·考马斯亮蓝染色及氢酶活性染色 | 第36-39页 |
| ·氢酶理化性质的测定 | 第39-40页 |
| ·温度对氢酶活性的影响 | 第39页 |
| ·pH 值对氢酶活性的影响 | 第39页 |
| ·不同电子载体对氢酶活性的影响 | 第39页 |
| ·氧对氢酶活性的影响 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-52页 |
| ·氢酶的分离与纯化 | 第40-47页 |
| ·可溶性氢酶和膜结合态氢酶的活性染色 | 第40-41页 |
| ·饱和硫酸铵沉淀 | 第41页 |
| ·Sephadex G-25 脱盐及酶液的浓缩 | 第41页 |
| ·DEAE Sepharose F.F. 柱层析 | 第41-43页 |
| ·Sephacryl S-200 柱层析 | 第43-44页 |
| ·TSK-DEAE 柱层析 | 第44-47页 |
| ·氢酶的理化性质 | 第47-52页 |
| ·温度对氢酶放氢活性的影响分析 | 第47-48页 |
| ·pH 对氢酶放氢活性的影响分析 | 第48-49页 |
| ·不同电子载体对氢酶放氢活性的影响分析 | 第49-50页 |
| ·氧对氢酶放氢活性的影响分析 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-55页 |
| ·氢酶活力和菌体量与菌体培养方式 | 第52页 |
| ·影响氢酶分离纯化的主要因素 | 第52-53页 |
| ·氢酶理化性质分析 | 第53-54页 |
| ·结论 | 第54-55页 |
| 5 后续工作展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
