摘要 | 第1-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
英文缩略词 | 第10-11页 |
第一章 绪论 | 第11-25页 |
·决定外源基因在大肠杆菌中表达水平的因素 | 第12-14页 |
·密码子偏好性对翻译顺利进行的重要意义 | 第14页 |
·骨形成蛋白BMP-4简介 | 第14-17页 |
·BMP-4基因结构 | 第15-16页 |
·BMP-4基因的作用 | 第16页 |
·BMP-4的蛋白质结构 | 第16-17页 |
·BMP-4的理化性质 | 第17页 |
·BMP-4的应用前景 | 第17页 |
·包涵体的概述 | 第17-21页 |
·包涵体的特性与形成过程 | 第18-19页 |
·减少包涵体形成的策略 | 第19页 |
·包涵体的变复性 | 第19-21页 |
·表达质粒pET-3c简介 | 第21-22页 |
·本研究的目的与主要内容 | 第22-25页 |
·本研究的意义 | 第22-23页 |
·本研究的主要内容 | 第23-25页 |
第二章 实验材料与方法 | 第25-37页 |
·主要仪器 | 第25-26页 |
·材料 | 第26-31页 |
·主要化学试剂 | 第26-27页 |
·实验菌株与质粒 | 第27页 |
·工具酶 | 第27页 |
·分子量参照物 | 第27页 |
·培养基 | 第27页 |
·实验试剂 | 第27-31页 |
·实验概况 | 第31页 |
·实验方法 | 第31-37页 |
·碱法小提质粒 | 第31-32页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
·DNA的酶切 | 第32页 |
·体外连接 | 第32页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
·转化 | 第33页 |
·转化子的鉴定 | 第33页 |
·SDS-PAGE | 第33-34页 |
·DEAE层析纯化包涵体 | 第34页 |
·包涵体复性 | 第34页 |
·复性后透析 | 第34页 |
·免疫印迹检测 | 第34-35页 |
·C2C12细胞传代 | 第35页 |
·C2C12细胞上板(96孔板) | 第35页 |
·表达产物的生物活性测定 | 第35-37页 |
第三章 高效表达rhBMP-4大肠杆菌GSH菌株的构建 | 第37-48页 |
·表达质粒pET-rhBMP4的构建与鉴定 | 第37-42页 |
·rhBMP-4引物的设计 | 第37-38页 |
·rhBMP-4核苷酸序列的全基因合成 | 第38-40页 |
·pET-rhBMP4重组质粒的构建 | 第40-41页 |
·pET-rhBMP4的鉴定 | 第41-42页 |
·测序 | 第42页 |
·高效稳定表达rhBMP-4的工程菌株GSH的建立 | 第42-44页 |
·诱导表达分析 | 第42-43页 |
·高表达菌株筛选 | 第43页 |
·重组质粒不稳定性研究—传代次数 | 第43-44页 |
·本部分小结和讨论 | 第44-48页 |
·rhBMP-4核苷酸序列的全基因合成 | 第44-46页 |
·pET-3c/rhBMP-4表达载体的构建 | 第46页 |
·高表达菌株的获得 | 第46-48页 |
第四章:GSH菌株发酵条件的优化 | 第48-62页 |
·重组大肠杆菌GSH菌株的生长曲线 | 第48-49页 |
·不同培养条件对GSH菌株生长的影响 | 第49-54页 |
·溶氧量对GSH菌株生长的影响 | 第49页 |
·不同接种量对菌体生长的影响 | 第49-50页 |
·IPTG对菌体生长的影响 | 第50-51页 |
·不同碳源对菌体生长的影响 | 第51-54页 |
·酵母提取物与蛋白胨比例对菌体生长的影响 | 第54页 |
·不同培养条件对rhBMP-4表达的影响 | 第54-58页 |
·不同接种量对rhBMP-4表达的影响 | 第54-55页 |
·不同摇瓶装液量对rhBMP-4表达的影响 | 第55页 |
·IPTG对rhBMP-4表达的影响 | 第55-57页 |
·不同碳源对rhBMP-4表达的影响 | 第57-58页 |
·酵母提取物/蛋白胨比例与rhBMP-4表达 | 第58页 |
·本部分小结与讨论 | 第58-62页 |
·不同培养条件对GSH菌株生长的影响 | 第58-60页 |
·不同培养条件对rhBMP-4表达的影响 | 第60-62页 |
第五章 rhBMP-4的复性摸索及活性检测 | 第62-69页 |
·菌体的获得与清洗 | 第62-63页 |
·rhBMP-4单体的离子交换层析纯化 | 第63页 |
·包涵体溶解 | 第63页 |
·梯度洗脱 | 第63页 |
·包涵体的复性 | 第63-64页 |
·用溶解液Ⅱ溶解蛋白沉淀 | 第63-64页 |
·用稀释法进行复性 | 第64页 |
·复性后rhBMP-4的活性分析 | 第64-66页 |
·rhBMP-4的理化性质鉴定 | 第64-65页 |
·碱性磷酸酶(ALP)表达量检测 | 第65-66页 |
·诱骨活性的测定 | 第66页 |
·本部分小结和讨论 | 第66-69页 |
·rhBMP-4纯化条件的摸索 | 第66-67页 |
·rhBMP-4复性后样品的处理和活性检测 | 第67-69页 |
第六章 实验的创新与展望 | 第69-71页 |
·本实验的创新点 | 第69页 |
·展望 | 第69-71页 |
参考文献 | 第71-77页 |
附录 | 第77-81页 |
致谢 | 第81页 |