| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-24页 |
| ·干扰素概述 | 第10页 |
| ·干扰素的分类与基因结构 | 第10-12页 |
| ·干扰素分类 | 第10页 |
| ·干扰素的分子结构 | 第10-12页 |
| ·干扰素基因与其编码的氨基酸数目 | 第11页 |
| ·N端糖基化位点对干扰素活性的影响 | 第11-12页 |
| ·半胱氨酸(Cys)的位置对干扰素活性的影响 | 第12页 |
| ·干扰素作用特点 | 第12页 |
| ·干扰素生物学活性 | 第12-14页 |
| ·抗病毒活性 | 第13页 |
| ·免疫调节活性 | 第13页 |
| ·抗肿瘤活性 | 第13-14页 |
| ·其它活性 | 第14页 |
| ·病毒感染与干扰素系统 | 第14-19页 |
| ·IFN的转录调节与诱导表达 | 第14-15页 |
| ·IFN的抗病毒作用机理 | 第15-16页 |
| ·IFN的信号通路 | 第16-18页 |
| ·病毒对IFN信号通路的抑制 | 第18-19页 |
| ·禽类干扰素研究进展 | 第19-22页 |
| ·Ⅰ型干扰素 | 第19-20页 |
| ·Ⅱ型干扰素 | 第20页 |
| ·禽类重组干扰素及其抗病毒效果 | 第20-22页 |
| ·干扰素用于治疗与预防疾病的潜力和效益 | 第22页 |
| ·市场前景 | 第22页 |
| ·社会效益和经济效益 | 第22页 |
| ·展望 | 第22-24页 |
| 2 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 3 材料与方法 | 第25-39页 |
| ·材料 | 第25-29页 |
| ·病毒、质粒及菌株 | 第25-26页 |
| ·酶及主要试剂 | 第26-27页 |
| ·一抗和二抗 | 第27页 |
| ·SPF鸡胚及免疫动物 | 第27页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第27-29页 |
| ·抗生素类 | 第27页 |
| ·细菌培养基 | 第27页 |
| ·质粒抽提相关溶液 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第27-28页 |
| ·Western-blot及蛋白质斑点杂交缓冲液 | 第28页 |
| ·提取包涵体的相关溶液 | 第28-29页 |
| ·镍亲和层析纯化(His.Bind Purification Kit)相关溶液 | 第29页 |
| ·ELISA相关溶液 | 第29页 |
| ·其他 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-39页 |
| ·引物设计 | 第29-30页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第30页 |
| ·ChIFN-α全长基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第31页 |
| ·PCR产物与pMD18-T载体的连接 | 第31页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第31页 |
| ·连接产物及质粒的转化 | 第31-32页 |
| ·质粒的制备 | 第32-33页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第32页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第32-33页 |
| ·ChIFNα-pMD18T质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·ChIFN-α全长序列测定 | 第33页 |
| ·ChIFN-α成熟蛋白基因(去掉信号肽部分)的克隆 | 第33页 |
| ·pET28a-IFNα(去掉信号肽部分)重组表达质粒的构建 | 第33页 |
| ·重组表达质粒的转化和鉴定 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)的诱导表达 | 第34页 |
| ·确定最佳的诱导表达条件 | 第34页 |
| ·小量诱导 | 第34页 |
| ·大量诱导 | 第34页 |
| ·细胞因子多克隆抗体的制备 | 第34-35页 |
| ·免疫原的制备 | 第34页 |
| ·免疫程序 | 第34-35页 |
| ·ELISA检测免疫动物的抗体水平 | 第35页 |
| ·表达蛋白的鉴定 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE | 第35页 |
| ·Western-blot and Dot-blot | 第35-36页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·提取包涵体法 | 第36页 |
| ·镍亲和层析法(HisBind Purification Kit) | 第36-37页 |
| ·鸡重组α干扰素的抗病毒效果分析 | 第37-39页 |
| ·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备 | 第37页 |
| ·细胞病变抑制法分析干扰素抗病毒活性 | 第37-38页 |
| ·H9N2禽流感病毒、新城疫强毒对鸡胚的毒力(EID_(50))测定 | 第38页 |
| ·鸡胚试验分析干扰素抗病毒效果分析 | 第38页 |
| ·H9N2禽流感病毒对雏鸡的毒力(LD_(50))测定 | 第38页 |
| ·雏鸡试验分析干扰素抗病毒效果 | 第38-39页 |
| 4 结果 | 第39-48页 |
| ·ChIFN-α的克隆及亚克隆 | 第39-40页 |
| ·ChIFN-α全长序列测序结果及序列分析 | 第40-41页 |
| ·表达质粒pET28a-IFNα的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组ChIFN-α的表达及Western blot鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组ChIFN-α Dot-blot鉴定 | 第43页 |
| ·重组ChIFN-α蛋白的纯化 | 第43页 |
| ·重组ChIFN-α的抗病毒效果分析 | 第43-48页 |
| ·细胞病变抑制法分析干扰素抗病毒活性 | 第43-44页 |
| ·鸡胚试验分析干扰素抗病毒效果 | 第44-46页 |
| ·H9N2禽流感病毒攻毒组 | 第44-45页 |
| ·新城疫强毒株攻毒组 | 第45-46页 |
| ·雏鸡试验分析干扰素抗病毒效果 | 第46-48页 |
| 5 讨论 | 第48-53页 |
| ·鸡干扰素基因的克隆和基因结构分析 | 第48页 |
| ·鸡干扰素基因在大肠杆菌中的表达 | 第48-49页 |
| ·大肠杆菌中表达蛋白包涵体的形成 | 第49页 |
| ·干扰素基因表达蛋白两种纯化方法的溶解与复性 | 第49-50页 |
| ·干扰素的剂量单位 | 第50-51页 |
| ·体外试验(细胞病变抑制法)测定干扰素抗病毒效果 | 第51页 |
| ·体内试验(鸡胚试验和雏鸡试验)测定干扰素抗病毒效果 | 第51-53页 |
| 6 小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第60-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
