| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 略语表 | 第9-10页 |
| 第一章 研究背景与研究目标 | 第10-25页 |
| 1. 传统鱼类基因转移技术 | 第10-11页 |
| ·转基因鱼研究历史 | 第10页 |
| ·传统转基因方法 | 第10-11页 |
| ·外源基因随机整合产生的问题 | 第11页 |
| 2. 基因打靶技术 | 第11-13页 |
| ·基因打靶概述 | 第11-12页 |
| ·鱼类中的基因打靶 | 第12-13页 |
| 3.C re/lox 位点特异性重组系统 | 第13-24页 |
| ·位点特异性重组 | 第13页 |
| ·Cre/lox系统概述 | 第13-16页 |
| ·Cre/lox系统在转基因中的应用 | 第16-19页 |
| ·提高Cre/lox系统整合反应效率的两种策略 | 第19-21页 |
| ·Cre重组酶介导的盒式交换反应 | 第21-23页 |
| ·Cre酶毒性问题 | 第23页 |
| ·Cre/lox系统在斑马鱼中的应用 | 第23-24页 |
| 4. 研究目标 | 第24-25页 |
| ·研究目标 | 第24页 |
| ·技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 盒式交换系统载体的构建 | 第25-40页 |
| 1. 材料和方法 | 第25-34页 |
| ·构建双交换载体的元件 | 第25页 |
| ·Cre基因的修饰 | 第25-27页 |
| ·载体元件DNA片段的制备 | 第27-30页 |
| ·DNA重组、转化及重组质粒鉴定 | 第30-34页 |
| 2. 结果 | 第34-37页 |
| ·重组质粒的构建流程 | 第34-37页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第37页 |
| 3. 讨论 | 第37-40页 |
| 第三章 斑马鱼胚胎中游离DNA片段的盒式交换反应 | 第40-51页 |
| 1. 材料与方法 | 第40-44页 |
| ·实验鱼 | 第40页 |
| ·CreRNA的制备 | 第40-42页 |
| ·CreRNA作用浓度的选择 | 第42页 |
| ·游离DNA片段盒式交换反应 | 第42-44页 |
| 2. 结果 | 第44-49页 |
| ·体外转录模板pCSCre的鉴定 | 第44-45页 |
| ·Cre 安全浓度的确定 | 第45页 |
| ·斑马鱼胚胎中游离DNA 片段的盒式交换反应 | 第45-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 斑马鱼胚胎中基因组片段的盒式交换反应 | 第51-68页 |
| 1. 材料与方法 | 第51-57页 |
| ·转pCMVlox66CreintEGFPlox2272斑马鱼研制 | 第51-52页 |
| ·内含子剪切的检测 | 第52-56页 |
| ·外源基因整合的PCR检测 | 第56页 |
| ·基因打靶操作 | 第56-57页 |
| 2. 结果 | 第57-65页 |
| ·转pCMVlox66CreintEGFPlox2272斑马鱼品系的建立 | 第57-58页 |
| ·检测内含子的剪切 | 第58-60页 |
| ·外源基因整合分析 | 第60-61页 |
| ·内源Cre介导的盒式交换反应 | 第61-65页 |
| 3. 讨论 | 第65-68页 |
| 小结 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 附录 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |