| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-14页 |
| 英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-19页 |
| ·椎间盘退变与治疗 | 第15页 |
| ·基因治疗椎间盘退变的研究现状 | 第15-16页 |
| ·杆状病毒的特点及其在基因治疗中的应用 | 第16页 |
| ·研究目的和内容 | 第16-19页 |
| 第二章 幼年与成年兔椎间盘髓核细胞的形态学差异及其意义 | 第19-26页 |
| 摘要 | 第19页 |
| ·材料与方法 | 第19-20页 |
| ·结果 | 第20-23页 |
| ·椎间盘的大体形态 | 第20-21页 |
| ·髓核细胞及其基质的形态结构 | 第21页 |
| ·髓核细胞的超微结构 | 第21-23页 |
| ·讨论 | 第23-26页 |
| 第三章 Ac/CMV/GFP 安全有效的转染兔椎间盘髓核细胞 | 第26-35页 |
| 摘要 | 第26-27页 |
| ·材料与方法 | 第27-29页 |
| ·Ac/CMV/GFP 的构建及扩增 | 第27页 |
| ·椎间盘髓核细胞的分离与培养 | 第27-28页 |
| ·杆状病毒转染髓核细胞效率的确定 | 第28页 |
| ·细胞生长与细胞活性的检测 | 第28页 |
| ·Ac/CMV/GFP 在离体培养的髓核细胞中表达水平的检测 | 第28页 |
| ·Ac/CMV/GFP 转染在体兔椎间盘髓核组织 | 第28-29页 |
| ·统计分析 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-33页 |
| ·杆状病毒对髓核细胞无毒性也不影响细胞的生存 | 第29-30页 |
| ·杆状病毒的转染效率以及转染的最佳浓度 | 第30-31页 |
| ·Ac/CMV/GFP 能在离体培养的髓核细胞中有效表达 | 第31-32页 |
| ·Ac/CMV/GFP 在体转染兔椎间盘后的一般反应 | 第32页 |
| ·Ac/CMV/GFP 能于在体转染的兔髓核组织中有效表达 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第四章 Ac/CMV/GFP 在退变兔椎间盘髓核细胞中的有效表达 | 第35-39页 |
| 摘要 | 第35-36页 |
| ·材料与方法 | 第36页 |
| ·椎间盘退变的造模 | 第36页 |
| ·细胞分组与处理 | 第36页 |
| ·统计学方法 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-38页 |
| ·椎间盘的大体形态 | 第36-37页 |
| ·细胞活性检测 | 第37页 |
| ·杆状病毒的转染效率 | 第37-38页 |
| ·外源性标志基因表达水平的检测 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 第五章 重组杆状病毒Ac/CMV/Sox9 的构建 | 第39-50页 |
| 摘要 | 第39页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·质粒和细菌 | 第39-40页 |
| ·昆虫细胞和椎间盘细胞 | 第40页 |
| ·实验所用病毒、bacmids 和引物 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-44页 |
| ·供体质粒pFGC-hsox9 的构建 | 第40-43页 |
| ·重组hSox98acmid 的获得 | 第43页 |
| ·重组hSox98acmid DNA 转染Sf21 细胞 | 第43页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第43-44页 |
| ·外源性Sox9 基因表达水平的免疫组化染色 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-48页 |
| ·酶切证实pFGC-hsox9 质粒中存在hSox9 基因 | 第44-45页 |
| ·PCR 检测证实重组病毒Ac-hSox9 Bacmid 中含有hSox9 | 第45-46页 |
| ·重组Ac-hSox9 Bacmid DNA 能够有效转染Sf21 细胞 | 第46-47页 |
| ·获得高滴度的重组杆状病毒 | 第47页 |
| ·外源性Sox9 基因能够在兔髓核细胞中表达 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第六章 Ac/CMV/Sox9 调控退变兔椎间盘髓核细胞的生物学活性 | 第50-54页 |
| 摘要 | 第50-51页 |
| ·材料和方法 | 第51页 |
| ·椎间盘退变的造模与在体转染 | 第51页 |
| ·兔椎间盘髓核组织切片和免疫组化染色 | 第51页 |
| ·统计分析 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-53页 |
| ·Ac/CMV/Sox9 能够维持兔髓核细胞的软骨细胞表型 | 第51-52页 |
| ·Ac/CMV/Sox9 可促进髓核细胞Ⅱ型胶原的合成 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 第七章 小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-65页 |
| 插图彩色图片 | 第65-69页 |
| 综述一 杆状病毒作为基因治疗载体的研究进展 | 第69-80页 |
| 综述二 基因治疗椎间盘退变的进展 | 第80-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第92页 |
