| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 缩写与符号 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| ·细胞凋亡 | 第14-15页 |
| ·细胞凋亡概念 | 第14页 |
| ·凋亡特征 | 第14-15页 |
| ·细胞凋亡抑制因子(IAP)的研究进展 | 第15-18页 |
| ·凋亡抑制因子的发现 | 第15页 |
| ·凋亡蛋白抑制因子(IAP)结构特征 | 第15-16页 |
| ·IAP的功能 | 第16页 |
| ·家蚕的凋亡蛋白抑制因子(BmIAP)分子结构特征 | 第16-18页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第18-19页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第19-20页 |
| ·定量RT-PCR的概念 | 第19页 |
| ·荧光定量RT-PCR的原理 | 第19-20页 |
| ·杆状病毒表达系 | 第20-23页 |
| ·杆状病毒表达系统的研究概况 | 第20页 |
| ·Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的原理 | 第20-22页 |
| ·杆状病毒表达系统的优点 | 第22-23页 |
| ·本课题研究的意义目的和内容 | 第23-24页 |
| ·本研究的意义 | 第23页 |
| ·本研究的目的 | 第23页 |
| ·本研究的主要内容 | 第23-24页 |
| 第二章 家蚕iap基因的克隆、测序与序列分析 | 第24-35页 |
| ·材料和方法 | 第24-31页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·常用缓冲液 | 第24-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·引物设计与合成 | 第26页 |
| ·家蚕组织中总RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·RNA质量的检测 | 第27页 |
| ·总RNA中DNA污染的去除 | 第27页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第27页 |
| ·家蚕IAP蛋白基因的PCR | 第27-28页 |
| ·连接反应 | 第28页 |
| ·感受态细胞制备 | 第28-29页 |
| ·质粒DNA转化 | 第29-30页 |
| ·质粒DNA酶切鉴定 | 第30页 |
| ·测序 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-34页 |
| ·PCR结果 | 第31页 |
| ·酶切鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·P12,P34测序结果 | 第32-33页 |
| ·家蚕iap基因序列比较 | 第33-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 家蚕iap基因在大肠杆菌中的表达 | 第35-42页 |
| ·材料与方法 | 第35-38页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·常用缓冲液 | 第35-37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·pET28a(+)-iap表达载体的构建 | 第37页 |
| ·iap基因在大肠杆菌中的表达 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE分析鉴定表达产物 | 第37-38页 |
| ·Western Blotting | 第38页 |
| ·结果和分析 | 第38-41页 |
| ·pET28a(+)-iap表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·重组质粒酶切鉴定结果 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE分析鉴定表达产物 | 第39-40页 |
| ·Wester nBlotting分析鉴定表达产物 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第四章 紫外线刺激下iap基因在家蚕幼虫和家蚕细胞中表达量的变化 | 第42-48页 |
| ·材料与方法 | 第42-45页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·主要试验仪器 | 第42页 |
| ·细胞培养 | 第42-43页 |
| ·家蚕幼虫及家蚕细胞处理 | 第43-44页 |
| ·RNA的提取(步骤见2.1.5) | 第44页 |
| ·cDNA第一条链的合成(步骤见2.1.8) | 第44页 |
| ·引物设计与合成 | 第44页 |
| ·荧光定量PCR | 第44-45页 |
| ·数据分析与统计学处理 | 第45页 |
| ·Real time PCR结果与分析 | 第45-47页 |
| ·受紫外线刺激家蚕幼虫中iap表达量的变化 | 第45-46页 |
| ·受紫外线刺激家蚕细胞中iap表达量的变化 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第五章 BmIAP对病毒感染家蚕细胞的影响 | 第48-58页 |
| ·材料和方法 | 第48-52页 |
| ·材料和试剂 | 第48页 |
| ·常用缓冲液 | 第48-49页 |
| ·培养基 | 第49-50页 |
| ·主要试验仪器 | 第50页 |
| ·重组转座载体的构建 | 第50页 |
| ·重组转座载体的鉴定 | 第50页 |
| ·重组Bacmid穿梭载体的构建 | 第50页 |
| ·重组Bacmid的提取 | 第50-51页 |
| ·重组Bacmid的PCR鉴定 | 第51页 |
| ·重组DNA的纯化 | 第51页 |
| ·昆虫细胞的培养 | 第51-52页 |
| ·重组Bacmid转染昆虫细胞 | 第52页 |
| ·pFastBacHTb-iap感染家蚕细胞后的PCR验证 | 第52页 |
| ·细胞存活率测定 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-56页 |
| ·重组转座载体的构建 | 第52-53页 |
| ·重组转座载体的酶切鉴定 | 第53页 |
| ·重组穿梭载体的PCR鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组Bacmid转染昆虫细胞 | 第54-56页 |
| ·细胞存活率测定分析 | 第56页 |
| ·本章小结 | 第56-58页 |
| 第六章 家蚕iap基因在真核细胞中的表达 | 第58-62页 |
| ·材料和方法 | 第58-59页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·主要试验仪器 | 第58页 |
| ·引物设计和合成 | 第58页 |
| ·pCDNA3.1-gfp-iap表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·iap基因在真核细胞中的表达 | 第59页 |
| ·结果和分析 | 第59-61页 |
| ·pCDNA3.1-gfp-iap表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·重组质粒酶切及PCR鉴定结果 | 第60页 |
| ·倒置显微镜观察转染的细胞 | 第60-61页 |
| ·本章小结 | 第61-62页 |
| 第七章 全文总结及工作展望 | 第62-63页 |
| ·主要结论 | 第62页 |
| ·工作展望 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 在学期间发表论文 | 第70页 |
