| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 绪言 | 第12-26页 |
| ·蝎与蝎毒 | 第12-13页 |
| ·中国东亚钳蝎抗癫痫药用研究 | 第13-14页 |
| ·转基因植物研究进展 | 第14-24页 |
| ·转基因植物的转化技术 | 第15-18页 |
| ·生产重组蛋白质的植物表达系统 | 第18-20页 |
| ·无抗性标记基因转基因植物 | 第20-23页 |
| ·分子检测 | 第23-24页 |
| ·立题依据 | 第24-26页 |
| 第二章 实验材料与仪器 | 第26-32页 |
| ·实验材料 | 第26-31页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·酶与化学试剂 | 第26页 |
| ·模板与引物 | 第26-27页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·常用抗生素贮存液 | 第27页 |
| ·培养基与激素 | 第27-29页 |
| ·各种缓冲液 | 第29-31页 |
| ·实验仪器 | 第31-32页 |
| 第三章 实验方法 | 第32-43页 |
| ·植物表达载体pBI-ANEP Ⅱ的构建 | 第32-36页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第32页 |
| ·目的DNA的PCR扩增 | 第32页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第32-33页 |
| ·插入片段ANEP Ⅱ的获得 | 第33-34页 |
| ·载体pBI121双酶切 | 第34页 |
| ·目的片段与载体片段的连接 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第35页 |
| ·测序引物 PCR验证 | 第35-36页 |
| ·工程菌pBI-ANEP Ⅱ/LBA4404的获得 | 第36-38页 |
| ·采用三亲交配法将pBI-ANEPⅡ导入农杆菌LBA4404 | 第36-37页 |
| ·采用改进冻融法将pBI-ANEPⅡ导入农杆菌LBA4404 | 第37页 |
| ·农杆菌质粒DNA的提取 | 第37页 |
| ·菌落PCR验证 | 第37-38页 |
| ·工程菌pBI-ANEPⅡ/LBA4404的保存 | 第38页 |
| ·植物遗传转化体系 | 第38-39页 |
| ·材料的培养 | 第38-39页 |
| ·培养条件 | 第39页 |
| ·植物再生体系的培养 | 第39页 |
| ·卡那霉素浓度筛选 | 第39页 |
| ·根癌农杆菌活化 | 第39页 |
| ·农杆菌叶盘转化法 | 第39页 |
| ·转基因植物的鉴定 | 第39-43页 |
| ·植物总 DNA提取法 | 第39-40页 |
| ·提取植物总 RNA | 第40-41页 |
| ·提取植物总蛋白质 | 第41页 |
| ·转化植株的 PCR检测 | 第41-42页 |
| ·外源基因表达的RT-PCR检测 | 第42页 |
| ·外源基因表达的Western Blot检测 | 第42-43页 |
| 第四章 结果与分析 | 第43-57页 |
| ·植物表达载体pBI-ANEPⅡ的构建 | 第43-47页 |
| ·插入片段ANEPⅡ的PCR扩增 | 第44页 |
| ·表达载体pBI121双酶切片段 | 第44页 |
| ·重组质粒pBI-ANEPⅡ进行PCR鉴定 | 第44-46页 |
| ·重组质粒pBI-ANEPⅡ进行限制性酶切鉴定 | 第46页 |
| ·测序引物PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·植物表达载体pBI-ANEPⅡ的序列测定报告(见附录) | 第47页 |
| ·工程菌pBI-ANEPⅡ/LBA4404的获得 | 第47-50页 |
| ·三亲交配法 | 第47-48页 |
| ·冻融法转化感受态农杆菌 | 第48-49页 |
| ·工程菌pBI-ANEPⅡ/LBA4404的PCR验证 | 第49-50页 |
| ·转化外植体体筛选及植株再生 | 第50-57页 |
| ·烟草与番茄消毒条件时间考察 | 第50页 |
| ·培养基激素水平选择 | 第50-51页 |
| ·卡那霉素选择压力的确定 | 第51-52页 |
| ·预培养对转化中植物叶片分化的影响 | 第52页 |
| ·重组农杆菌菌液浓度对转化的影响 | 第52-53页 |
| ·农杆菌感染时间对遗传转化的影响 | 第53-54页 |
| ·转化植株的 PCR鉴定 | 第54页 |
| ·提取转基因烟草总RNA和RT-PCR | 第54-56页 |
| ·外源基因表达的Western blot检测 | 第56-57页 |
| 第五章 讨论 | 第57-60页 |
| ·PCR引物的设计 | 第57页 |
| ·载体构建中酶联体系选择 | 第57页 |
| ·菌落直接PCR鉴定筛选重组子 | 第57-58页 |
| ·根癌农杆菌介导的烟草转化 | 第58-60页 |
| 第六章 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 植物图片 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
