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西瓜、甜瓜遗传转化体系的建立及转基因植株的抗病性分析

中文摘要第1-13页
英文摘要第13-16页
1. 引言第16-55页
   ·葫芦科概述第16-18页
     ·葫芦科的特征第16页
     ·葫芦科种类第16-17页
     ·西瓜概述第17页
     ·甜瓜概述第17-18页
   ·植物组织培养技术研究进展第18-20页
     ·愈伤组织分类第19页
     ·愈伤组织再生植株途径第19页
     ·外植体类型第19页
     ·培养条件第19-20页
   ·西、甜瓜组织培养愈伤组织再生植株研究进展第20-27页
     ·西瓜、甜瓜组培再生体系的建立第21-23页
     ·西瓜、甜瓜转基因方法第23-27页
     ·转基因对西瓜、甜瓜有益农艺性状的改良及其展望第27页
   ·抗真菌植物基因工程的策略和进展第27-49页
     ·植物病程相关蛋白(PR)和水解酶第28-31页
     ·抗真菌蛋白(或肽)第31-33页
     ·核糖体灭活蛋白(RIP),PR 蛋白第33-34页
     ·溶菌酶第34页
     ·抗菌肽第34-35页
     ·利用渗透蛋白基因第35页
     ·我国自己发现的抗真菌蛋白第35页
     ·导入作物自身的真菌抗性基因第35-37页
     ·调节植物防卫反应的基因激发子第37-39页
     ·利用植物抗病基因第39-40页
     ·抗真菌基因工程面临的挑战第40-41页
     ·抗真菌基因工程中存在的问题、解决途径及展望第41-49页
   ·西瓜、甜瓜抗真菌病害育种研究进展第49-53页
     ·西瓜枯萎病简介第50页
     ·枯萎病的防治及抗病育种研究进展第50-51页
     ·西瓜、甜瓜抗病育种中面临的问题第51-53页
     ·西瓜、甜瓜抗病基因工程进展第53页
   ·本研究的目的和意义第53-55页
2. 材料与方法第55-75页
   ·试验材料第55-57页
     ·植物材料第55页
     ·菌株与质粒第55-56页
     ·生化试剂和其它材料来源第56页
     ·PCR 引物第56-57页
   ·实验方法第57-75页
     ·西瓜、甜瓜组培再生体系的建立第57-58页
     ·西瓜、甜瓜的遗传转化第58-59页
     ·以 PNZIP 为启动子的质粒的改造第59-61页
     ·连接产物的转化及阳性克隆筛选第61-64页
     ·以PNZIP 为启动子的质粒转入农杆菌LBA4404 和农杆菌EHA105第64-65页
     ·利用农杆菌介导转化西瓜、甜瓜第65-66页
     ·西瓜、甜瓜转化植株的 PCR 检测第66-67页
     ·转基因植株的 Northern blot 检测第67-69页
     ·转基因西瓜、甜瓜植株内葡聚糖和几丁质酶活性的测定第69-71页
     ·转基因西瓜、甜瓜的抗病检测第71-75页
3. 结果与分析第75-105页
   ·西瓜、甜瓜离体再生体系的建立第75-82页
     ·种胚发芽率第75-76页
     ·不定芽的诱导第76-82页
   ·农杆菌介导西瓜、甜瓜遗传转化体系的优化第82-87页
     ·抗生素敏感性第82-83页
     ·预培养对遗传转化的影响第83页
     ·农杆菌菌株类型和共培养时间对转化的影响第83-84页
     ·菌液浓度对转化频率的影响第84页
     ·侵染时间对转化频率的影响第84-85页
     ·乙酰丁香酮(acetosyringone;AS)等对农杆菌介导转化的影响第85-87页
   ·植物表达载体的构建第87-95页
     ·三价融合基因(FG)的来源、特征和空间结构第87-90页
     ·PNZIP 启动子第90-91页
     ·构建以 PNZIP 为启动子的三价融合基因的过程第91-92页
     ·融合基因的 PCR 鉴定第92-93页
     ·融合基因转入农杆菌第93-95页
   ·转基因西瓜、甜瓜植株的获得第95-99页
     ·抗kan 西瓜、甜瓜植株 PCR 检测第95页
     ·转 FG1 基因中的西瓜、甜瓜植株葡聚糖酶(GLU)PCR 检测第95-96页
     ·转 FG1 基因中的西瓜、甜瓜植株几丁质酶(CH1)PCR 检测第96-97页
     ·转 FG1 基因中的西瓜、甜瓜植株硫堇蛋白(TH1)PCR 检测第97-98页
     ·转 FG1 基因西瓜、甜瓜植株 PCR 检测第98页
     ·转基因西瓜、甜瓜 Northern blot 分析第98-99页
   ·转基因西瓜、甜瓜的抗病性分析第99-105页
     ·转基因西瓜、甜瓜抗灰霉菌试验第99-100页
     ·转基因西瓜、甜瓜抗炭疽菌抗性试验第100-101页
     ·转基因西瓜对枯萎病抗性试验第101页
     ·转基因西瓜、甜瓜植株的葡聚糖酶和几丁质酶活性测定第101-105页
4. 讨论第105-111页
   ·西瓜、甜瓜离体再生体系的建立第105-106页
   ·农杆菌介导西瓜、甜瓜遗传转化体系的优化第106页
   ·植物抗病基因工程中多个基因联合导入第106-108页
   ·植物抗病反应中抗真菌蛋白的协同效应第108-109页
   ·植物抗病反应中抗病基因的高效定位表达第109-111页
彩图1第111-112页
彩图2第112-113页
彩图3第113-114页
彩图4第114-115页
彩图5第115-117页
结论第117-118页
参考文献第118-134页
致谢第134页

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