| 摘要 | 第1-3页 |
| ABSTRACT | 第3-6页 |
| 第一章 引言 | 第6-17页 |
| ·研究意义 | 第6-7页 |
| ·研究现状 | 第7-15页 |
| ·内江猪的产地与性状简介 | 第7-8页 |
| ·IL-2的简介 | 第8-15页 |
| ·猪IL-2的DNA和蛋白质序列 | 第9页 |
| ·IL-2在免疫系统中作用原理 | 第9-12页 |
| ·重组IL-2表达的研究进展 | 第12-13页 |
| ·体外重组IL-2的应用现状 | 第13-15页 |
| ·研究思路： | 第15-17页 |
| 第二章 试验材料与方法 | 第17-30页 |
| ·主要试验仪器与材料、试剂 | 第17-19页 |
| ·主要试验仪器 | 第17页 |
| ·试验材料、载体和菌种 | 第17页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第17-19页 |
| ·试验步骤与方法 | 第19-30页 |
| ·采血与淋巴细胞的分离活化 | 第19页 |
| ·淋巴细胞总RNA的提取 | 第19-20页 |
| ·IL-2基因的体外扩增 | 第20-21页 |
| ·引物的设计 | 第20页 |
| ·反转录合成cDNA | 第20-21页 |
| ·PCR扩增 | 第21页 |
| ·IL-2克隆载体的构建 | 第21-25页 |
| ·电泳与目的片段的回收纯化 | 第21-22页 |
| ·质粒载体的准备 | 第22页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·目的片段和载体质粒的连接转化 | 第23页 |
| ·重组质粒的抽提 | 第23-24页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第24-25页 |
| ·表达载体构建 | 第25-27页 |
| ·IL-2基因的酶切回收 | 第25-26页 |
| ·表达载体PET-32a(+)的酶切回收 | 第26页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)感受态的制备 | 第26页 |
| ·IL-2基因与PET-32a(+)的连接与转化 | 第26页 |
| ·表达载体的鉴定 | 第26-27页 |
| ·蛋白的表达与鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组表达质粒在大肠杆菌BL_(21)(DE3)中的刺激表达 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的灌制与电泳 | 第27页 |
| ·染色与脱色 | 第27-28页 |
| ·MTT法检测蛋白的活性 | 第28-30页 |
| ·应答细胞的制备 | 第28页 |
| ·重组蛋白的变性及复性 | 第28-29页 |
| ·测吸光度 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第30-44页 |
| ·PCR扩增结果 | 第30-33页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒T-IL-2的序列测定 | 第35页 |
| ·与其它物种IL-2基因同源性分析结果 | 第35-37页 |
| ·SDS-GAGE电泳结果 | 第37-40页 |
| ·蛋白活性检测 | 第40-44页 |
| ·复性蛋白与未复性蛋白的活性对比 | 第40-41页 |
| ·MTT溶液的用量 | 第41-42页 |
| ·MTT溶液的作用时间 | 第42-44页 |
| 第四章 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 附录 | 第50页 |