蚓激酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
| 学位论文原创性声明 | 第1页 |
| 专利权声明 | 第3页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-22页 |
| ·纤溶系统 | 第8页 |
| ·溶栓药物的特点 | 第8-9页 |
| ·蚓激酶的研究进展 | 第9-15页 |
| ·蚯蚓 | 第9-10页 |
| ·蚓激酶的理化特性 | 第10-11页 |
| ·蚓激酶的结构特征 | 第11页 |
| ·蚓激酶进行水解的部位 | 第11页 |
| ·蚓激酶溶栓机理 | 第11-12页 |
| ·蚓激酶的分离纯化 | 第12-13页 |
| ·蚓激酶分子生物学研究进展 | 第13页 |
| ·蚓激酶临床应用进展 | 第13-15页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第15-20页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白的进展 | 第16页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优越性 | 第16页 |
| ·表达载体 | 第16-18页 |
| ·宿主菌 | 第18页 |
| ·影响外源蛋白高效表达的因素 | 第18-20页 |
| ·本课题的立题依据及研究内容 | 第20-22页 |
| ·立题依据 | 第20-21页 |
| ·论文研究的主要内容及技术路线 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-33页 |
| ·实验材料 | 第22-26页 |
| ·菌种与质粒 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-24页 |
| ·相关溶液 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-33页 |
| ·蚯蚓总 RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第27页 |
| ·蚓激酶基因的克隆及序列分析 | 第27-29页 |
| ·蚓激酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第29-32页 |
| ·工程菌生长曲线和pH值曲线的测定 | 第32-33页 |
| 3 结果与讨论 | 第33-57页 |
| ·蚯蚓总 RNA的提取 | 第33页 |
| ·蚓激酶基因的 RT-PCR扩增 | 第33-36页 |
| ·引物 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第34-36页 |
| ·蚓激酶基因的克隆及序列分析 | 第36-43页 |
| ·pUCm-T载体 | 第36页 |
| ·克隆载体的构建 | 第36-37页 |
| ·重组子的筛选和鉴定 | 第37-38页 |
| ·测序结果及序列分析 | 第38-43页 |
| ·蚓激酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第43-50页 |
| ·成熟肽基因的获得 | 第43页 |
| ·pPIC9载体 | 第43页 |
| ·表达载体的构建 | 第43-45页 |
| ·转化大肠杆菌及重组子的鉴定 | 第45-46页 |
| ·表达载体的线性化 | 第46页 |
| ·酵母转化子表型的鉴定 | 第46-47页 |
| ·高表达菌株的筛选 | 第47-50页 |
| ·工程菌发酵条件的研究 | 第50-57页 |
| ·工程菌生长曲线和pH值曲线 | 第51-52页 |
| ·工程菌发酵条件的优化 | 第52-57页 |
| 4 结论 | 第57-59页 |
| ·本论文的主要结论 | 第57-58页 |
| ·本论文的创新点 | 第58-59页 |
| 5 展望 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 研究生阶段发表论文情况 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
