| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 第一篇 文献综述 | 第16-48页 |
| 一、HSP70分子伴侣系统 | 第16-24页 |
| 1 分子伴侣(molecullar champerone) | 第16页 |
| 2 分子伴侣的分类 | 第16页 |
| 3 热休克蛋白的发现 | 第16-17页 |
| 4 HSP70家族的基因定位及基因特性 | 第17-18页 |
| 5 HSP70蛋白的结构 | 第18-19页 |
| 6 HSP70蛋白的功能 | 第19-20页 |
| 7 HSP70分子伴侣系统 | 第20-21页 |
| 8 多肽结合功能域结合底物的专一性 | 第21页 |
| 9 HSP70的作用机理 | 第21-23页 |
| 10 HSP70和HSP90蛋白共同组成蛋白折叠的中继站 | 第23-24页 |
| 11 展望 | 第24页 |
| 二、Hsp蛋白与细胞凋亡 | 第24-31页 |
| 1 Hsps与细胞凋亡 | 第25-26页 |
| 2 HSPs与Fas死亡受体途径 | 第26-27页 |
| 3 HSPs与JNK／SAPK途径 | 第27-28页 |
| 4 HSPs与caspase酶途径 | 第28-31页 |
| 三、HSF的结构与功能 | 第31-36页 |
| 1 HSF的发现 | 第31-32页 |
| 2 HSF的类别与功能 | 第32页 |
| 3 HSF的结构 | 第32-34页 |
| 4 HSF活化过程 | 第34-35页 |
| 5 HSF的调节 | 第35-36页 |
| 6 现状与展望 | 第36页 |
| 四、有关奶牛热应激细胞免疫调控及分子机理研究进展 | 第36-39页 |
| 1 热应激对奶牛生产性能的影响 | 第36-37页 |
| 2 奶牛热应激的基因调控 | 第37-39页 |
| 3 奶牛热应激的基因调节的研究中存在的问题 | 第39页 |
| 参考文献 | 第39-48页 |
| 第二篇 实验研究 | 第48-120页 |
| 实验一、热应激对奶牛外周血液学影响 | 第48-55页 |
| 1 材料和方法 | 第48-49页 |
| 1．1 实验动物 | 第48页 |
| 1．2 血常规分析 | 第48-49页 |
| 1．3 数据分析 | 第49页 |
| 2 结果 | 第49-53页 |
| 3 讨论 | 第53页 |
| 4 本章小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-55页 |
| 实验二、热应激对奶牛外周血淋巴细胞周期及凋亡的影响 | 第55-62页 |
| 1 材料和方法 | 第55-56页 |
| 1．1 实验动物 | 第55-56页 |
| 1．2 流式细胞仪分析热应激奶牛淋巴细胞凋亡率、细胞周期及增殖指数 | 第56页 |
| 1．3 数据分析 | 第56页 |
| 2 结果 | 第56-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 3．1 细胞凋亡流式检测的方法的优缺点 | 第58-59页 |
| 3．2 高温对淋巴细胞的凋亡率及细胞分裂周期的影响 | 第59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 实验三、热应激奶牛外周淋巴细胞凋亡相关基因的表达 | 第62-77页 |
| 1 材料和方法 | 第62-67页 |
| 1．1 实验动物 | 第62-63页 |
| 1．2 实验试剂 | 第63页 |
| 1．3 主要设备及分析软件 | 第63页 |
| 1．4 实验方法 | 第63-67页 |
| 1．4．1 血样的采集 | 第63页 |
| 1．4．2 淋巴细胞的分离 | 第63页 |
| 1．4．3 总RNA的提取 | 第63页 |
| 1．4．4 RT反应 | 第63页 |
| 1．4．5 引物的设计 | 第63-64页 |
| 1．4．6 半定量PCR条件的优化 | 第64-67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-71页 |
| 2．1 RNA质量 | 第67-68页 |
| 2．2 RNA的反转录效果的鉴定 | 第68页 |
| 2．3 各基因的基因扩增的循环圈数的摸索 | 第68-69页 |
| 2．4 内标18s rRNA引物与竞争物(Competimer)比例 | 第69页 |
| 2．5 不同温度条件下HSP70mRNA，HSF1mRNA，Bcl-2mRNA及Bax-αmRNA表达水平 | 第69-71页 |
| 3 讨论 | 第71-74页 |
| 3．1 相对定量RT-PCR条件的优化 | 第71-72页 |
| 3．2 高温对外周血淋巴细胞HSP70mRNA，HSF1mRNA，Bcl-2mRNA及Bax-αmRNA表达水平的影响及基因的互作 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-77页 |
| 实验四、热应激奶牛外周淋巴细胞bax-αmRNA的荧光定量PCR分析 | 第77-82页 |
| 1 材料和方法 | 第77-78页 |
| 1．1 材料和实验动物 | 第77页 |
| 1．2 总RNA的提取 | 第77页 |
| 1．4 引物的设计 | 第77页 |
| 1．5 荧光定量PCR分析初始bax-α基因表达量 | 第77-78页 |
| 2 结果 | 第78-80页 |
| 2．1 bax-α的熔解曲线 | 第78页 |
| 2．2 Bax-α基因定量 | 第78-80页 |
| 3 讨论 | 第80页 |
| 参考文献 | 第80-82页 |
| 实验五、HSP70启动子区SNPs与奶牛外周淋巴细胞凋亡相关基因表达的相关性 | 第82-97页 |
| 1 材料和方法 | 第82-87页 |
| 1．1 实验动物 | 第83页 |
| 1．2 奶牛血液基因组DNA的提取 | 第83-84页 |
| 1．3 聚丙烯酰胺凝胶制备 | 第84页 |
| 1．4 银染 | 第84页 |
| 1．5 HSP70 5’-侧翼区的基因多态性分析、测序及突变位点分析 | 第84-87页 |
| 1．6 分析不同基因型奶牛外周血淋巴细胞凋亡率及凋亡相关基因的表达 | 第87页 |
| 2 结果 | 第87-92页 |
| 2．1 HSP70 5’-侧翼区的基因调控区分析 | 第87-88页 |
| 2．2 HSP70 5’-侧翼区基因多态性研究 | 第88-89页 |
| 2．3 四种带型奶牛PCR产物序列比较分析 | 第89-90页 |
| 2．4 高温下不同基因型奶牛HSP70mRNA，HSF1mRNA，Bcl-2mRNA，Bax-αmRNA和Bcl-2mRNA／Bax-αmRNA基因表达的差异 | 第90-92页 |
| 2．5 流式细胞仪分析各基因型奶牛日平均气温37.5℃下外周血淋巴细胞的凋亡率 | 第92页 |
| 3 讨论 | 第92-94页 |
| 3．1 HSP70基因启动区SNPs的研究意义 | 第92-93页 |
| 3．2 奶牛热应激分子标记的初步筛选研究 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-97页 |
| 实验六、牛源HSP70基因克隆、测序、点突变、分子进化、pET32a-c(+)原核表达及活性检测 | 第97-120页 |
| 1 材料和方法 | 第98-106页 |
| 1．1 DNA提取 | 第98页 |
| 1．2 bHSP70基因的克隆 | 第98-99页 |
| 1．3 将目的基因bHSP70连接到pGEM(?)-T Easy Vector上(TA克隆) | 第99-101页 |
| 1．4 DNAstar2.0软件分析 | 第101-102页 |
| 1．5 设计有粘性接头的引物扩增bHSP70基因 | 第102页 |
| 1．6 pET32a-c(+)载体的制备(具有粘性接头) | 第102-103页 |
| 1．7 bHSP70基因双酶切 | 第103页 |
| 1．8 pET32a-c(+)-bHSP70重组质粒的构建 | 第103-104页 |
| 1．9 重组pET32a-c(+)-bHSP70质粒转化DE3(BL21)菌 | 第104页 |
| 1．10 IPTG诱导bhsp70重组蛋白的表达与SDS-PAGE电泳 | 第104-105页 |
| 1．11 免疫印记(Western-blot)检测rbHSP70重组蛋白 | 第105-106页 |
| 1．12 重组bHSP70生物活性的检测 | 第106页 |
| 2 结果 | 第106-117页 |
| 2．1 HSP70基因的克隆 | 第106-107页 |
| 2．2 HSP70的开放阅读框点突变发现及其对蛋白质特性的影响 | 第107页 |
| 2．3 HSP70家族蛋白的序列与分子的进化分析 | 第107-114页 |
| 2．4 pET-32a-c(+)-bHSPT0原核表达载体的构建 | 第114-115页 |
| 2．5 IPTG诱导重组质粒pET-32a-c(+)-bHSP70的DE3转化子重组蛋白的表达 | 第115-116页 |
| 2．6 重组bHSP70生物活性的检测 | 第116-117页 |
| 3 讨论 | 第117-118页 |
| 3．1 牛源HSP70基因的克隆及其在分子进化上的意义 | 第117-118页 |
| 3．2 牛源HSP70基因原核表达及意义 | 第118页 |
| 参考文献 | 第118-120页 |
| 全文结论 | 第120-121页 |
| 全文创新 | 第121-122页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
