| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-19页 |
| ·小反刍兽疫的分布概况 | 第14页 |
| ·PPRV 病原学 | 第14-15页 |
| ·分子生物学特性 | 第15页 |
| ·流行病学 | 第15-16页 |
| ·诊断方法研究进展 | 第16-17页 |
| ·病毒的分离培养 | 第16页 |
| ·病毒中和试验 | 第16页 |
| ·反转录多聚酶链式反应 | 第16页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第16-17页 |
| ·PPR 的预防 | 第17页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第17-19页 |
| 第二章 小反刍兽疫病毒 F 基因的原核表达 | 第19-34页 |
| ·实验材料 | 第19-23页 |
| ·质粒、菌毒株和细胞 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·实验所用溶液及配制 | 第19-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-28页 |
| ·Vero 细胞的培养 | 第23-24页 |
| ·小反刍兽疫病毒 Nigeria75/1 疫苗株病毒扩增 | 第24页 |
| ·引物的设计与合成 | 第24页 |
| ·提取病毒总 RNA | 第24页 |
| ·PPRV-F2 基因的扩增及克隆 | 第24-25页 |
| ·目的基因与 T 载体的连接转化 | 第25-26页 |
| ·重组原核表达质粒的构建与鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第27-28页 |
| ·表达重组蛋白的可溶性分析 | 第28页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第28页 |
| ·重组蛋白的 Western blot 鉴定 | 第28页 |
| ·实验结果 | 第28-32页 |
| ·病毒体外扩增结果 | 第28-29页 |
| ·F2 基因的扩增产物 | 第29页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白诱导时间的确定 | 第30-31页 |
| ·表达产物的可溶性分析 | 第31-32页 |
| ·纯化后的表达产物的 Western blot 分析 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 小反刍兽疫病毒 F 蛋白在杆状病毒中的克隆表达 | 第34-44页 |
| ·实验材料 | 第34-36页 |
| ·质粒、菌株及细胞株 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·实验溶液 | 第34-35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-39页 |
| ·目的基因的扩增 | 第36页 |
| ·重组供体质粒 pFastBacHTA-F 的构建及鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组穿梭质粒的构建 | 第37页 |
| ·提取重组的穿梭质粒 | 第37页 |
| ·重组穿梭质粒的鉴定 | 第37页 |
| ·重组穿梭质粒转染 Sf21 昆虫细胞，获得重组杆状病毒 | 第37-38页 |
| ·分离 P1 代重组杆状病毒 | 第38页 |
| ·扩增重组病毒 | 第38页 |
| ·Western blot 鉴定重组蛋白的抗原性 | 第38-39页 |
| ·间接免疫荧光鉴定重组蛋白的抗原性 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-42页 |
| ·扩增目的基因 | 第39页 |
| ·重组质粒 pFastBacHTA-F 的鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组 rBacmid-PPRV-F 质粒的 PCR 鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组杆状病毒的获得 | 第41页 |
| ·重组蛋白的 Western blot 检测 | 第41-42页 |
| ·表达蛋白免疫荧光检测 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 小反刍兽疫病毒 F 蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第44-56页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·抗原、细胞系和实验动物 | 第44页 |
| ·主要耗材及仪器 | 第44页 |
| ·主要溶液的配制 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-51页 |
| ·PPRV 抗原和 His-PPRV-F2 抗原的制备 | 第45-46页 |
| ·抗原免疫小鼠 | 第46页 |
| ·免疫小鼠血清抗体效价的测定 | 第46-47页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第47页 |
| ·脾淋巴细胞的制备 | 第47页 |
| ·骨髓瘤细胞的制备 | 第47页 |
| ·细胞融合 | 第47-48页 |
| ·融合细胞的选择性培养 | 第48页 |
| ·间接 ELISA 筛选阳性杂交瘤细胞 | 第48-49页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆化 | 第49页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第49页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第49页 |
| ·单克隆抗体腹水的制备 | 第49-50页 |
| ·杂交瘤细胞染色体分析 | 第50页 |
| ·Western blot 检测单克隆抗体 | 第50页 |
| ·间接免疫荧光检测单克隆抗体 | 第50-51页 |
| ·杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的稳定性测定 | 第51页 |
| ·实验结果 | 第51-54页 |
| ·小鼠血清抗体效价的测定 | 第51页 |
| ·细胞融合率 | 第51页 |
| ·杂交瘤细胞阳性的克隆率 | 第51页 |
| ·小鼠腹水效价 | 第51页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第51-52页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数分析 | 第52页 |
| ·单克隆抗体的 Western blot 鉴定 | 第52-53页 |
| ·单克隆抗体的间接免疫荧光鉴定 | 第53-54页 |
| ·杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性的测定 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 全文总结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
