| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 插图与附表清单 | 第8-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-12页 |
| 目录 | 第12-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-20页 |
| 第二章 中国特有小型猪内源性反转录病毒存在状况的调查 | 第20-30页 |
| 摘要 | 第20页 |
| Abstract | 第20-21页 |
| 1 材料与方法 | 第21-23页 |
| 1．1 材料 | 第21-22页 |
| 1．1．1 检测样品 | 第21页 |
| 1．1．2 工具酶和试剂 | 第21-22页 |
| 1．1．3 主要仪器 | 第22页 |
| 1．1．4 主要溶液配制 | 第22页 |
| 1．2 外周血淋巴细胞的分离 | 第22页 |
| 1．3 PBL DNA的制备 | 第22页 |
| 1．4 PBL RNA的制备 | 第22-23页 |
| 1．5 引物的设计与合成 | 第23页 |
| 1．6 PCR扩增与分析 | 第23页 |
| 1．7 RT-PCR反应与分析 | 第23页 |
| 2 结果 | 第23-27页 |
| 2．1 中国小型猪基因组中 PERV亚型存在的检测 | 第23-25页 |
| 2．2 PERV编码基因存在的检测 | 第25-26页 |
| 2．3 PERV亚型表达的检测 | 第26-27页 |
| 2．4 PERV编码基因的表达的检测 | 第27页 |
| 3 讨论 | 第27-28页 |
| 4 小结 | 第28-30页 |
| 第三章 猪内源性反转录病毒感染 HEK293细胞模型的建立 | 第30-36页 |
| 摘要 | 第30页 |
| ABSTRACT | 第30页 |
| 1 材料与方法 | 第30-32页 |
| 1．1 材料 | 第30-31页 |
| 1．2 选择性培养基 | 第31页 |
| 1．3 G418~R293细胞的准备 | 第31页 |
| 1．4 细胞的共培养 | 第31页 |
| 1．5 G418压力筛选 | 第31页 |
| 1．6 细胞基因组 DNA和总 RNA的制备 | 第31页 |
| 1．7 感染细胞的鉴定 | 第31-32页 |
| 1．7．1 引物的设计与合成 | 第31页 |
| 1．7．2 PCR鉴定 | 第31-32页 |
| 1．7．3 RT-PCR鉴定 | 第32页 |
| 2 结果 | 第32-34页 |
| 2．1 共培养细胞压力筛选结果 | 第32页 |
| 2．2 共培养体系中筛除猪源细胞的 PCR鉴定结果 | 第32页 |
| 2．3 HEK293细胞感染 PERV的 PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 2．4 HEK293细胞感染 PERV的 RT-PCR鉴定 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 4 小结 | 第35-36页 |
| 第四章 猪内源性反转录病毒全序列测定与功能分析 | 第36-70页 |
| 摘要 | 第36页 |
| Abstract | 第36-37页 |
| 1． 材料与方法 | 第37-43页 |
| 1．1 病毒来源材料 | 第37页 |
| 1．2 质粒和菌株 | 第37页 |
| 1．3 工具酶及主要试剂 | 第37页 |
| 1．4 参考毒株 | 第37页 |
| 1．5 主要溶液配制 | 第37-38页 |
| 1．6 引物设计 | 第38-39页 |
| 1．7 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 1．8 总 RNA的制备 | 第39页 |
| 1．9 MRNA的纯化 | 第39-40页 |
| 1．10 cDNA的合成 | 第40页 |
| 1．11 PCR及套式 PCR扩增 | 第40-41页 |
| 1．12 RERV-WZS株非编码区的扩增 | 第41-42页 |
| 1．12．1 5'UTR的扩增 | 第41-42页 |
| 1．12．2 3'UTR的扩增 | 第42页 |
| 1．13 目的片段的纯化、回收 | 第42页 |
| 1．14 PCR产物克隆与鉴定 | 第42-43页 |
| 1．15 克隆质粒测序与拼接 | 第43页 |
| 1．16 序列的比较与功能分析 | 第43页 |
| 2 结果 | 第43-63页 |
| 2．1 外周血淋巴细胞总 RNA的提取 | 第43-44页 |
| 2．2 RT-PCR及克隆结果 | 第44-46页 |
| 2．3 测序结果 | 第46-52页 |
| 2．4 293-PERV-WZS与 PERV-BM毒株全序列测定 | 第52页 |
| 2．5 序列分析 | 第52-63页 |
| 2．5．1 全基因组序列同源性分析 | 第53-54页 |
| 2．5．2 PERV-WZS非编码区分析 | 第54-56页 |
| 2．5．2．1 5'UTR区的分析 | 第54-56页 |
| 2．5．2．2 3'UTR区的分析 | 第56页 |
| 2．5．3 PERV-WZS编码区分析 | 第56-62页 |
| 2．5．3．1 ENV基因的分析 | 第56-62页 |
| 2．5．3．2 GAG、POL基因的分析 | 第62页 |
| 2．5．4 嗜人 PERV与猪源 PERV的比较 | 第62-63页 |
| 2．5．5 PERV-WZS株与 PERV-BM株的比较 | 第63页 |
| 3 讨论 | 第63-68页 |
| 3．1 关于 PCR反应条件与基因的扩增 | 第63-64页 |
| 3．2 关于基因组序列分析 | 第64页 |
| 3．3 关于非编码区的结构与功能分析 | 第64-66页 |
| 3．4 关于编码区的结构与功能分析 | 第66-67页 |
| 3．5 关于 PERV不同毒株的分析 | 第67-68页 |
| 4 小结 | 第68-70页 |
| 第五章 PERV-WZS株全长cDNA克隆的构建 | 第70-79页 |
| 摘要 | 第70页 |
| Abstract | 第70-71页 |
| 1 材料与方法 | 第71-74页 |
| 1．1 材料 | 第71页 |
| 1．1．1 病毒来源 | 第71页 |
| 1．1．2 质粒和菌株 | 第71页 |
| 1．1．3 工具酶及主要试剂 | 第71页 |
| 1．1．4 主要溶液配制及仪器设备 | 第71页 |
| 1．2 方法 | 第71-74页 |
| 1．2．1 引物设计 | 第71-72页 |
| 1．2．2 外周血白细胞的制备及总 RNA的提取 | 第72页 |
| 1．2．3 RT-PCR | 第72-73页 |
| 1．2．4 PCR产物的克隆 | 第73页 |
| 1．2．5 全长cDNA的连接 | 第73-74页 |
| 2 结果 | 第74-77页 |
| 2．1 cDNA合成及 RT-PCR结果 | 第74-75页 |
| 2．2 PCR产物的克隆、鉴定及全长cDNA的连接 | 第75页 |
| 2．3 全长cDNA克隆的鉴定 | 第75-77页 |
| 2．3．1 外源序列的插入情况的鉴定 | 第75-76页 |
| 2．3．2 全长cDNA克隆的鉴定 | 第76页 |
| 2．3．3 全长cDNA克隆稳定性鉴定 | 第76-77页 |
| 3 讨论 | 第77-78页 |
| 3．1 关于病毒全长cDNA克隆的构建策略 | 第77页 |
| 3．2 关于 PCR扩增及全长cDNA克隆的鉴定 | 第77页 |
| 3．3 关于病毒全长cDNA克隆的稳定性 | 第77-78页 |
| 3．4 关于反向遗传学操作技术 | 第78页 |
| 4 小结 | 第78-79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 文献综述 | 第80-91页 |
| 1 PERV分子生物学特性的研究 | 第80-86页 |
| 1．1 PERV的生活周期简介 | 第80页 |
| 1．2 PERV的形态学特征 | 第80-81页 |
| 1．3 PERV的基因组结构及功能 | 第81-83页 |
| 1．4 PERV基因组编码的蛋白质及功能 | 第83-86页 |
| 1．4．1 核心蛋白(Gag) | 第83-84页 |
| 1．4．2 酶蛋白(Pol) | 第84-85页 |
| 1．4．3 囊膜蛋白(Env) | 第85-86页 |
| 2 PERV的感染性与异种移植的安全性 | 第86-89页 |
| 3 PERV检测技术的研究进展 | 第89-91页 |
| 3．1 病毒的分离与鉴定 | 第89页 |
| 3．2 血清学诊断试验 | 第89页 |
| 3．3 单克隆抗体技术 | 第89-90页 |
| 3．4 分子生物学诊断技术 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 作者简介 | 第113-114页 |
