中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-10页 |
前言 | 第10-13页 |
文献综述 | 第13-27页 |
1 黄麻的分类与遗传研究 | 第13-17页 |
·黄麻分类研究 | 第13-14页 |
·黄麻的遗传研究 | 第14-17页 |
2 植物染色体微分离、微克隆技术研究进展 | 第17-27页 |
·染色体微分离、微克隆技术的原理 | 第17-18页 |
·染色体微分离、微克隆技术程序 | 第18-23页 |
·染色体标本的制作与目标染色体的辨认 | 第18-19页 |
·染色体的显微切割与分离 | 第19-21页 |
·流式细胞分类器法 | 第19页 |
·微细玻璃针法 | 第19-20页 |
·显微激光切割法 | 第20页 |
·显微激光切割与微细玻璃针结合法 | 第20-21页 |
·微克隆的建立 | 第21-23页 |
·微克隆文库的鉴定 | 第23页 |
·染色体微分离、微克隆技术在植物中的应用 | 第23-26页 |
·构建特定染色体或染色体区域DNA文库 | 第23页 |
·筛选DNA文库 | 第23-24页 |
·制备染色体着染探针池 | 第24页 |
·构建高密度分子标记连锁图谱 | 第24-25页 |
·基因组物理图谱的构建 | 第25页 |
·染色体进化和比较基因组研究 | 第25-26页 |
·植物染色体微分离、微克隆技术存在的问题 | 第26-27页 |
第一章 黄麻单染色体的显微分离及体外扩增 | 第27-38页 |
1 材料和方法 | 第27-31页 |
·供试材料 | 第27页 |
·染色体标本的制备 | 第27-28页 |
·染色体的显微分离 | 第28页 |
·单染色体的体外扩增 | 第28-30页 |
·LA-PCR | 第28-29页 |
·Sau3A连接接头的制备 | 第28页 |
·LA-PCR扩增 | 第28-29页 |
·DOP-PCR | 第29-30页 |
·单染色体扩增产物的Southern杂交检验 | 第30-31页 |
·电泳和转膜 | 第30页 |
·探针制备 | 第30页 |
·预杂交 | 第30页 |
·杂交 | 第30-31页 |
·洗膜及压片 | 第31页 |
·显影和定影 | 第31页 |
2 结果与分析 | 第31-35页 |
·黄麻染色体标本的制备 | 第31-32页 |
·黄麻单染色体的显微分离 | 第32页 |
·单染色体的体外扩增 | 第32-34页 |
·LA-PCR扩增 | 第32-33页 |
·DOP-PCR扩增 | 第33-34页 |
·Southern杂交分析 | 第34-35页 |
3 讨论 | 第35-38页 |
·单染色体微分离的关键技术 | 第35页 |
·单染色体扩增的污染问题 | 第35-36页 |
·扩增片段大小的影响因素 | 第36-38页 |
第二章 黄麻cDNA文库构建与探针筛选初探 | 第38-50页 |
1 材料与方法 | 第38-43页 |
·供试材料 | 第38页 |
·黄麻总RNA提取和mRNA的获得 | 第38页 |
·第一链cDNA合成 | 第38-39页 |
·cDNA的LD PCR扩增 | 第39页 |
·蛋白酶消化与Sfi Ⅰ酶切 | 第39页 |
·cDNA分级 | 第39-40页 |
·cDNA与λ TriplEx2载体连接 | 第40页 |
·包装 | 第40页 |
·细菌平板培养 | 第40-41页 |
·滴度测定 | 第41-42页 |
·插入片段大小鉴定 | 第42页 |
·λ TriplEx2阳性克隆向pTriplEx2质粒克隆的转化与片段鉴定 | 第42页 |
·菌落点于高密度膜上,用于膜阵列杂交分析 | 第42-43页 |
·cDNA膜阵列杂交筛选探针 | 第43页 |
2 结果与分析 | 第43-47页 |
·黄麻总RNA提取 | 第43-44页 |
·cDNA合成 | 第44页 |
·cDNA的分级 | 第44-45页 |
·cDNA文库滴度测定 | 第45-46页 |
·插入片段大小鉴定 | 第46-47页 |
·菌落点于高密度膜上后的生长情况 | 第47页 |
·cDNA膜阵列杂交筛选探针 | 第47页 |
3 讨论 | 第47-49页 |
·cDNA文库构建的关键环节 | 第47-48页 |
·cDNA膜阵列杂交筛选探针的探索 | 第48-49页 |
4 下一步工作计划 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-56页 |
附录A | 第56-57页 |
附录B | 第57-58页 |
致谢 | 第58页 |