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黄麻单染色体的分离和扩增及cDNA探针高通量筛选初探

中文摘要第1-8页
英文摘要第8-10页
前言第10-13页
文献综述第13-27页
 1 黄麻的分类与遗传研究第13-17页
   ·黄麻分类研究第13-14页
   ·黄麻的遗传研究第14-17页
 2 植物染色体微分离、微克隆技术研究进展第17-27页
   ·染色体微分离、微克隆技术的原理第17-18页
   ·染色体微分离、微克隆技术程序第18-23页
     ·染色体标本的制作与目标染色体的辨认第18-19页
     ·染色体的显微切割与分离第19-21页
       ·流式细胞分类器法第19页
       ·微细玻璃针法第19-20页
       ·显微激光切割法第20页
       ·显微激光切割与微细玻璃针结合法第20-21页
     ·微克隆的建立第21-23页
     ·微克隆文库的鉴定第23页
   ·染色体微分离、微克隆技术在植物中的应用第23-26页
     ·构建特定染色体或染色体区域DNA文库第23页
     ·筛选DNA文库第23-24页
     ·制备染色体着染探针池第24页
     ·构建高密度分子标记连锁图谱第24-25页
     ·基因组物理图谱的构建第25页
     ·染色体进化和比较基因组研究第25-26页
   ·植物染色体微分离、微克隆技术存在的问题第26-27页
第一章 黄麻单染色体的显微分离及体外扩增第27-38页
 1 材料和方法第27-31页
   ·供试材料第27页
   ·染色体标本的制备第27-28页
   ·染色体的显微分离第28页
   ·单染色体的体外扩增第28-30页
     ·LA-PCR第28-29页
       ·Sau3A连接接头的制备第28页
       ·LA-PCR扩增第28-29页
     ·DOP-PCR第29-30页
   ·单染色体扩增产物的Southern杂交检验第30-31页
     ·电泳和转膜第30页
     ·探针制备第30页
     ·预杂交第30页
     ·杂交第30-31页
     ·洗膜及压片第31页
     ·显影和定影第31页
 2 结果与分析第31-35页
   ·黄麻染色体标本的制备第31-32页
   ·黄麻单染色体的显微分离第32页
   ·单染色体的体外扩增第32-34页
     ·LA-PCR扩增第32-33页
     ·DOP-PCR扩增第33-34页
   ·Southern杂交分析第34-35页
 3 讨论第35-38页
   ·单染色体微分离的关键技术第35页
   ·单染色体扩增的污染问题第35-36页
   ·扩增片段大小的影响因素第36-38页
第二章 黄麻cDNA文库构建与探针筛选初探第38-50页
 1 材料与方法第38-43页
   ·供试材料第38页
   ·黄麻总RNA提取和mRNA的获得第38页
   ·第一链cDNA合成第38-39页
   ·cDNA的LD PCR扩增第39页
   ·蛋白酶消化与Sfi Ⅰ酶切第39页
   ·cDNA分级第39-40页
   ·cDNA与λ TriplEx2载体连接第40页
   ·包装第40页
   ·细菌平板培养第40-41页
   ·滴度测定第41-42页
   ·插入片段大小鉴定第42页
   ·λ TriplEx2阳性克隆向pTriplEx2质粒克隆的转化与片段鉴定第42页
   ·菌落点于高密度膜上,用于膜阵列杂交分析第42-43页
   ·cDNA膜阵列杂交筛选探针第43页
 2 结果与分析第43-47页
   ·黄麻总RNA提取第43-44页
   ·cDNA合成第44页
   ·cDNA的分级第44-45页
   ·cDNA文库滴度测定第45-46页
   ·插入片段大小鉴定第46-47页
   ·菌落点于高密度膜上后的生长情况第47页
   ·cDNA膜阵列杂交筛选探针第47页
 3 讨论第47-49页
   ·cDNA文库构建的关键环节第47-48页
   ·cDNA膜阵列杂交筛选探针的探索第48-49页
 4 下一步工作计划第49-50页
参考文献第50-56页
附录A第56-57页
附录B第57-58页
致谢第58页

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