| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一部分 前言 | 第9-19页 |
| 1 艾滋病及其流行状况简介 | 第9-10页 |
| 2 HIV简介 | 第10-13页 |
| ·HIV的结构 | 第10-12页 |
| ·基因组 | 第11页 |
| ·病毒蛋白 | 第11-12页 |
| ·HIV的生活周期 | 第12页 |
| ·HIV的主要生物及物理特性 | 第12-13页 |
| 3 Gag抗原的抗HIV的保护功能 | 第13页 |
| 4 HIV的检测 | 第13-17页 |
| ·HIV检测中的重要抗原及Gag抗原抗体的特性 | 第13-14页 |
| ·常用的HIV的实验方法 | 第14页 |
| ·标准的血清学实验 | 第14-17页 |
| ·p24抗原检测HIV感染 | 第17页 |
| 5 国内外的HIV检测研究状况 | 第17-18页 |
| 6 论文研究内容 | 第18-19页 |
| 第二部分 实验内容 | 第19-36页 |
| 1 材料与仪器 | 第19-21页 |
| ·质粒与菌种 | 第19-20页 |
| ·主要试剂及材料 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| 2 方法 | 第21-27页 |
| ·目的基因的克隆与鉴定 | 第21-22页 |
| ·目的基因片断的PCR扩增 | 第21-22页 |
| ·目的基因PCR扩增产物的纯化 | 第22页 |
| ·目的基因PCR扩增产物的酶切鉴定 | 第22页 |
| ·重组载体的构建与鉴定 | 第22-24页 |
| ·双酶切载体质粒 | 第22页 |
| ·双酶切目的DNA | 第22页 |
| ·连接目的DNA和质粒 | 第22-23页 |
| ·重组质粒转入Top 10感受态细胞进行扩增 | 第23页 |
| ·重组质粒快速检测 | 第23页 |
| ·制备重组质粒并鉴定 | 第23-24页 |
| ·重组质粒的电泳鉴定 | 第24页 |
| ·重组质粒的双酶切电泳鉴定 | 第24页 |
| ·表达菌株的筛选 | 第24-25页 |
| ·重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞 | 第24页 |
| ·诱导表达 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第24-25页 |
| ·表达的Gag蛋白Ni-NTA分离纯化 | 第25-26页 |
| ·表达细胞的裂解物的制备 | 第25页 |
| ·Ni-NTA柱的准备 | 第25页 |
| ·变性条件下纯化 | 第25-26页 |
| ·透析浓缩及复性 | 第26页 |
| ·测蛋白含量 | 第26页 |
| ·表达蛋白作蛋白印迹(Western Blotting)检测 | 第26-27页 |
| ·抗原的间接酶联免疫应用 | 第27页 |
| 3 结果 | 第27-34页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)表达重组质粒gag-pTrcHis2 A的构建策略 | 第27-28页 |
| ·gag基因的PCR克隆与鉴定 | 第28页 |
| ·重组载体的构建与鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| ·透析浓缩及复性后蛋白质浓度的计算 | 第31-32页 |
| ·Western blot | 第32-33页 |
| ·ELISA的应用研究 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三部分 小结 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-42页 |
| 致谢 | 第42页 |