| 致谢 | 第1-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| 英文摘要 | 第7-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-27页 |
| 第一节 木聚糖及其化学结构 | 第12-13页 |
| 第二节 木聚糖酶及其分类 | 第13页 |
| 第三节 木聚糖酶的生化特性 | 第13-16页 |
| 第四节 木聚糖酶的分子结构 | 第16-20页 |
| 1 连接域 | 第17页 |
| 2 催化域 | 第17页 |
| 3 底物结合域 | 第17-18页 |
| 4 纤维素结合域 | 第18-19页 |
| 5 热稳定性结构域 | 第19页 |
| 6 嗜酸性结构域 | 第19-20页 |
| 第五节 木聚糖酶作用机理 | 第20-21页 |
| 第六节 木聚糖酶基因的克隆与表达 | 第21-23页 |
| 第七节 木聚糖酶的应用研究进展 | 第23-26页 |
| 1 木聚糖酶在饲料工业中的应用 | 第23-25页 |
| 2 木聚糖酶在造纸工业中的应用 | 第25页 |
| 3 木聚糖酶在食品工业中的应用 | 第25-26页 |
| 4 木聚糖酶在其它领域中的应用 | 第26页 |
| 第八节 研究目的 | 第26-27页 |
| 第二章 出发菌株酶活鉴定及其部分酶学特性 | 第27-31页 |
| 1 试验材料与方法 | 第27-29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-31页 |
| ·环状芽孢杆菌BC木聚糖酶水解RBB-木聚糖的透明圈 | 第29页 |
| ·环状芽孢杆菌BC产木聚糖酶活性 | 第29页 |
| ·pH对环状芽孢杆菌BC木聚糖酶(WBCX)活性的影响 | 第29-30页 |
| ·温度对环状芽孢杆菌BC木聚糖酶(WBCX)的活性影响 | 第30-31页 |
| 第三章 环状芽孢杆菌木聚糖酶基因的克隆 | 第31-46页 |
| 1 克隆策略 | 第31-32页 |
| 2 试验材料 | 第32-33页 |
| 3 试验方法 | 第33-39页 |
| ·基因DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·环状芽孢杆菌木聚糖酶基因的克隆 | 第34-35页 |
| ·DNA电泳 | 第35页 |
| ·目的片段的割胶回收 | 第35-36页 |
| ·DNA片段的连接 | 第36页 |
| ·感受态细胞的制备与转化 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第37-38页 |
| ·木聚糖酶基因的序列测定 | 第38-39页 |
| ·同源性比较 | 第39页 |
| 4 试验结果 | 第39-46页 |
| ·基因组DNA提取 | 第39页 |
| ·木聚糖酶基因的TD-PCR扩增 | 第39页 |
| ·阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第39-40页 |
| ·环状芽孢杆菌木聚糖酶基因序列及其它来源木聚糖酶的同源性 | 第40-46页 |
| 第四章 环状芽孢杆菌木聚糖酶基因在E.coli BL21中的表达 | 第46-56页 |
| 1 表达策略 | 第46-48页 |
| ·利用pET表达系统 | 第46-47页 |
| ·利用pGEX表达系统 | 第47-48页 |
| 2 试验材料 | 第48页 |
| 3 试验方法 | 第48-51页 |
| 4 试验结果 | 第51-56页 |
| ·含限制性酶切位点木聚糖酶全长基因的扩增 | 第51页 |
| ·阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第51-52页 |
| ·含木聚糖酶基因的重组质粒的双酶切 | 第52页 |
| ·表达载体的双酶切 | 第52-53页 |
| ·木聚糖酶基因与表达载体的连接及阳性重组子的筛选鉴定 | 第53-55页 |
| ·阳性表达子的筛选 | 第55-56页 |
| 第五章 不同表达系统产酶量和β-1,4-木聚糖酶特性研究 | 第56-67页 |
| 1 试验材料 | 第56-57页 |
| 2 试验方法 | 第57-61页 |
| ·基因工程菌的培养 | 第57-58页 |
| ·木聚糖酶活测定方法 | 第58页 |
| ·木聚糖酶特性分析 | 第58页 |
| ·表达酶蛋白的纯化 | 第58-59页 |
| ·蛋白质含量测定方法 | 第59页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第59-61页 |
| 3 试验结果 | 第61-67页 |
| ·基因工程菌产环状芽孢杆菌源木聚糖酶(BCX)的活性 | 第61页 |
| ·温度对木聚糖酶BCX活性的影响 | 第61-62页 |
| ·pH对木聚糖酶BCX活性的影响 | 第62页 |
| ·木聚糖酶BCX的热稳定性 | 第62-63页 |
| ·木聚糖酶BCX的pH稳定性 | 第63-64页 |
| ·E.coli BCE5木聚糖酶BCX的分离纯化 | 第64-66页 |
| ·E.coli BCE5木聚糖酶BCX的SDS-PAGE电泳 | 第66-67页 |
| 第六章 分析讨论 | 第67-72页 |
| 1 环状芽孢杆菌木聚糖酶基因序列分析讨论 | 第67-69页 |
| 2 基因工程菌和出发菌株产酶水平及工程酶和野生型酶生物学特性 | 第69-70页 |
| 3 pET表达系统和pGEX表达系统 | 第70页 |
| 4 降落式PCR(TD-PCR)技术 | 第70-71页 |
| 5 进一步研究的工作 | 第71-72页 |
| 第七章 结论 | 第72-73页 |
| 第八章 参考文献 | 第73-87页 |
| 附录一 pGEM-T easy Vector | 第87-88页 |
| 附录二 pET-30a(+)Vector | 第88-89页 |
| 附录三 pGEX-4T-3 Vector | 第89-90页 |
| 附录四 本研究所用缩写词 | 第90页 |
