| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-26页 |
| ·蚓激酶及其研究进展 | 第8-13页 |
| ·概述 | 第8-9页 |
| ·蚓激酶的生理学特征 | 第9页 |
| ·蚓激酶的溶栓机理 | 第9-10页 |
| ·蚓激酶的临床应用 | 第10-11页 |
| ·蚓激酶的基因工程表达研究 | 第11-13页 |
| ·霍乱毒素（cholera toxin，CT）及其B 型亚单位（CTB） | 第13-14页 |
| ·表达载体的密码子偏好性及优化 | 第14-15页 |
| ·生物密码子分析现状 | 第14页 |
| ·密码子偏好性 | 第14-15页 |
| ·密码子的优化 | 第15页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第15-26页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优点 | 第16页 |
| ·毕赤酵母表达宿主菌 | 第16-17页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第17-18页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第18-21页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的生物学特性 | 第21-22页 |
| ·巴氏毕赤酵母的分子生物学特性 | 第22-23页 |
| ·影响异源蛋白在巴斯德毕赤酵母中表达水平的因素 | 第23-26页 |
| 第二章 对CTB-LK 基因密码子的优化 | 第26-31页 |
| ·材料和试剂 | 第26页 |
| ·引物 | 第26页 |
| ·工具酶和试剂 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·DNA 的琼脂糖凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·从琼脂糖中回收DNA | 第27页 |
| ·普通PCR | 第27-28页 |
| ·重叠延伸PCR 技术 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-31页 |
| 第三章 毕赤酵母表达载体构建 | 第31-48页 |
| ·材料和试剂 | 第31-36页 |
| ·质粒、菌株和引物 | 第31-32页 |
| ·主要实验仪器 | 第32-33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| ·主要溶液 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第36-37页 |
| ·小规模提取大肠杆菌质粒法（CTAB 法） | 第37页 |
| ·DNA 的限制酶消化 | 第37-38页 |
| ·DNA 的连接反应 | 第38页 |
| ·菌体生长量的检测 | 第38-39页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-44页 |
| ·中间载体pBluescript SK-CTB -LKA 的构建 | 第39-41页 |
| ·毕赤酵母表达CTB-LKA 的载体构建 | 第41-44页 |
| ·实验操作过程中的遇到的一些问题 | 第44-46页 |
| ·酶切注意事项 | 第44页 |
| ·外源基因与表达载体的连接 | 第44-45页 |
| ·PCR 常见问题 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-48页 |
| 第四章 CTB-LKA 在毕赤酵母中的表达及验证 | 第48-62页 |
| ·实验材料 | 第48-50页 |
| ·质粒和菌株 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| ·培养基及主要溶液 | 第48-50页 |
| ·实验方法 | 第50-57页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第50-52页 |
| ·转化子的筛选 | 第52-53页 |
| ·酵母菌落PCR 筛选阳性克隆 | 第53页 |
| ·毕赤酵母总RNA 提取 | 第53-54页 |
| ·毕赤酵母的诱导表达 | 第54页 |
| ·发酵上清液中蛋白的提取 | 第54-55页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白质凝胶电泳 | 第55-56页 |
| ·纤维蛋白平板检验生物活性 | 第56-57页 |
| ·结果讨论 | 第57-62页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第57页 |
| ·毕赤酵母的转化后G418 筛选 | 第57-59页 |
| ·菌落PCR 筛选效果 | 第59页 |
| ·纤维蛋白平板法测定外源蛋白活性 | 第59-60页 |
| ·上清液SDS-PAGE 检测 | 第60-62页 |
| 第五章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |