| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 第一章 综述 | 第12-32页 |
| 第一节 国内外养殖海参主要疾病及其防治的研究进展 | 第12-23页 |
| 1 国外海参主要疾病的研究进展 | 第12-16页 |
| ·国外海参细菌性疾病 | 第12-13页 |
| ·国外海参寄生性疾病 | 第13-15页 |
| ·原生动物寄生虫类 | 第13-14页 |
| ·扁形动物类寄生虫 | 第14页 |
| ·环节动物寄生虫类 | 第14页 |
| ·软体动物寄生虫类 | 第14页 |
| ·节肢动物寄生虫类 | 第14-15页 |
| ·国外海参真菌性疾病 | 第15-16页 |
| 2. 国内海参主要疾病的研究进展 | 第16-19页 |
| ·国内海参细菌性疾病 | 第16-18页 |
| ·刺参育苗期的细菌性疾病 | 第16-17页 |
| ·刺参保苗期的细菌性疾病 | 第17页 |
| ·幼体培育及养成阶段的细菌性疾病 | 第17-18页 |
| ·国内海参寄生性疾病 | 第18-19页 |
| ·扁形动物寄生性疾病 | 第18页 |
| ·纤毛虫类寄生性疾病 | 第18-19页 |
| ·国内海参真菌性疾病 | 第19页 |
| 3. 刺参常见疾病的防治措施 | 第19-21页 |
| ·海参细菌性疾病的防治措施 | 第19-21页 |
| ·刺参育苗期细菌性疾病的防治措施 | 第19-20页 |
| ·刺参保苗期细菌性疾病的预防措施 | 第20页 |
| ·幼体培育及养成阶段细菌性疾病的预防措施 | 第20-21页 |
| ·海参寄生性疾病的预防措施 | 第21页 |
| ·扁形动物寄生性疾病的预防措施 | 第21页 |
| ·纤毛虫类寄生性疾病的预防措施 | 第21页 |
| ·海参真菌性疾病的预防措施 | 第21页 |
| 4. 海参的敌害生物及其预防技术 | 第21-22页 |
| 5. 结语 | 第22-23页 |
| 第二节 分子生物学技术在水产动物疾病诊断中的研究进展 | 第23-32页 |
| 1. 免疫学诊断技术 | 第23-24页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第23-24页 |
| ·荧光抗体技术 | 第24页 |
| ·酶免疫技术 | 第24页 |
| 2 核酸诊断技术 | 第24-30页 |
| ·分子杂交技术 | 第25-26页 |
| ·斑点杂交技术 | 第25页 |
| ·原位杂交技术 | 第25-26页 |
| ·PCR 快速诊断技术 | 第26-28页 |
| ·常规PCR 诊断技术 | 第26-27页 |
| ·PCR 衍生技术 | 第27-28页 |
| ·基因芯片技术 | 第28-29页 |
| ·1651RNA 技术 | 第29页 |
| ·RAPD 技术 | 第29-30页 |
| 3. 核酸技术与免疫学技术结合的方法 | 第30-31页 |
| 4. 结语 | 第31-32页 |
| 第二章 刺参（Apostichopus japonicus）“腐皮综合症”PCR 检测方法的建立 | 第32-48页 |
| 第一节 灿烂弧菌的16s-23s rDNA 间区(Intergenics pacer,IGS)的克隆、测序与分析.. | 第32-39页 |
| 1 材料与方法 | 第33-37页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·菌株 | 第33页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第33页 |
| ·16s-23s 间隔区序列的PCR 引物 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-37页 |
| ·菌株培养 | 第33页 |
| ·细菌基因组DNA 的提取 | 第33-34页 |
| ·PCR 扩增反应 | 第34页 |
| ·PCR 反应产物的纯化 | 第34-35页 |
| ·PCR 产物与克隆载体连接 | 第35页 |
| ·大肠杆菌TG1 感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·连接产物的转化 | 第36页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第36页 |
| ·阳性质粒的提取 | 第36-37页 |
| ·IGS 序列测序 | 第37页 |
| 2 结果 | 第37-38页 |
| ·PCR 扩增 | 第37页 |
| ·测序结果 | 第37-38页 |
| 3. 讨论 | 第38-39页 |
| 第二节 刺参“腐皮综合症”主要致病菌快速PCR 检测方法的建立与应用 | 第39-48页 |
| 1. 材料与方法 | 第39-43页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·刺参 | 第39-40页 |
| ·菌株 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-43页 |
| ·菌株培养方法 | 第40页 |
| ·菌株感染刺参的方法 | 第40-41页 |
| ·细菌总DNA 提取方法 | 第41页 |
| ·直接从细菌培养液中提取细菌总DNA | 第41页 |
| ·从动物组织中提取细菌总DNA | 第41页 |
| ·特异性PCR 引物的设计 | 第41页 |
| ·最适退火温度的选择和PCR 反应条件的优化 | 第41-42页 |
| ·PCR 方法特异性的检测 | 第42页 |
| ·PCR 方法灵敏度的检测 | 第42页 |
| ·PCR 检测方法的应用 | 第42-43页 |
| 2. 结果 | 第43-47页 |
| ·人工感染实验结果 | 第43页 |
| ·特异性PCR 引物的设计结果 | 第43页 |
| ·最适退火温度的选择和PCR 反应条件的优化 | 第43-45页 |
| ·PCR 方法特异性的检测 | 第45页 |
| ·PCR 方法灵敏度的检测 | 第45页 |
| ·PCR 方法对刺参组织弧菌的检测 | 第45-47页 |
| 3. 讨论 | 第47-48页 |
| 第三章 刺参“腐皮综合症”点杂交检测方法的建立及初步应用 | 第48-57页 |
| 1 材料与方法 | 第48-51页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·刺参 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-51页 |
| ·DNA的提取 | 第49页 |
| ·刺参的人工感染 | 第49页 |
| ·PCR 法制备地高辛(DIG)标记DNA 探针 | 第49页 |
| ·DIG 标记DNA 探针产量的测定 | 第49-50页 |
| ·探针的特异性、敏感性检测 | 第50页 |
| ·斑点杂交检测方法的建立 | 第50-51页 |
| 2 结果 | 第51-55页 |
| ·PCR 法制备DIG 标记探针 | 第51页 |
| ·PCR 制备地高辛（DIG）标记DNA 探针产量测定结果 | 第51-52页 |
| ·斑点杂交检测探针的特异性 | 第52页 |
| ·探针的灵敏度检测 | 第52页 |
| ·地高辛（DIG）标记V.splendidus DNA 探针斑点杂交检测各样品 | 第52-55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| ·探针的特异性和灵敏度 | 第55页 |
| ·斑点杂交用于样品检测的可行性 | 第55-57页 |
| 第四章 刺参“腐皮综合症”原位杂交检测方法的建立 | 第57-64页 |
| 1 材料与方法 | 第57-60页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·实验样品 | 第57页 |
| ·药品试剂 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-60页 |
| ·玻片的处理 | 第57-58页 |
| ·组织切片的制备 | 第58页 |
| ·HE 染色 | 第58页 |
| ·原位杂交 | 第58-60页 |
| 2 结果 | 第60-62页 |
| ·刺参“腐皮综合症”组织学病理观察 | 第60页 |
| ·原位杂交检测 | 第60-62页 |
| 3. 讨论 | 第62-64页 |
| 第五章 三种快速分子检测方法的比较与分析 | 第64-67页 |
| 1 材料与方法 | 第64-65页 |
| ·试验材料 | 第64页 |
| ·人工感染试验 | 第64页 |
| ·样品处理 | 第64页 |
| ·几种快速检测方法的检测 | 第64-65页 |
| 2 结果 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-67页 |
| 第六章 总结及展望 | 第67-69页 |
| 1、研究成果 | 第67-68页 |
| 2、后续工作及展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 附录 | 第78-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 作者简历 | 第84页 |
