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中国野生华东葡萄霜霉病菌接种的SSH文库构建及EST序列分析

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-13页
第一章 文献综述第13-28页
   ·植物抗病性研究进展第13页
     ·植物抗病性的表现第13页
   ·植物的抗病机制第13-18页
     ·植物抗病基因第15-16页
       ·植物抗病基因的类型第15页
       ·植物抗病基因的结构与功能第15-16页
       ·抗病基因的起源与进化第16页
     ·植物防卫基因第16-18页
         ·植物防卫基因的主要类型第16-17页
       ·植物防卫基因的组织结构第17页
       ·植物防卫基因的表达调控第17-18页
   ·抑制消减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization SSH)第18-20页
     ·SSH技术的操作流程第18-19页
     ·SSH技术的特点第19-20页
     ·SSH技术在植物基因分离上的应用第20页
   ·葡萄霜霉病第20-26页
     ·葡萄霜霉病的起源及分布第20页
     ·葡萄霜霉病菌第20-23页
       ·葡萄霜霉病菌分类及形态特征第20-21页
       ·葡萄霜霉病生物学及流行学第21-23页
     ·影响霜霉病流行发展的因素第23-24页
       ·感病寄主第23页
       ·病原物第23页
       ·环境条件第23-24页
     ·葡萄属植物对霜霉病的抗性第24-26页
       ·结构抗病性第24页
       ·化学抗病性第24-26页
     ·葡萄抗霜霉病遗传第26页
     ·葡萄属植物抗霜霉病的分子生物学研究第26页
   ·本研究的目的意义第26-28页
第二章 材料与方法第28-39页
   ·材料第28页
     ·葡萄材料第28页
     ·葡萄霜霉菌第28页
     ·生化试剂第28页
     ·仪器第28页
   ·方法第28-39页
     ·葡萄霜霉菌的收集和菌液的制备及菌孢子的观察、接种方法第28-29页
       ·葡萄霜霉菌的收集和菌液的制备第28页
       ·葡萄霜霉菌菌孢子的观察和培养第28-29页
         ·葡萄霜霉菌的接种方法第29页
     ·实验用葡萄叶片材料的采集和保存第29页
     ·葡萄叶片RNA的提取、纯化和mRNA的分离第29-31页
       ·葡萄叶片RNA的提取第29页
       ·RNA的纯化第29-30页
       ·mRNA的分离第30页
       ·mRNA分离液的浓缩第30-31页
     ·反转录(第一、第二链的合成)及酶切第31-32页
       ·反转录第31页
       ·RsaI酶切第31-32页
     ·接头连接和消减杂交第32-35页
       ·接头连接第32-33页
       ·消减杂交第33页
       ·PCR扩增第33-34页
       ·PCR产物纯化第34-35页
     ·消减文库的建立、阳性克隆的筛选第35-36页
       ·纯化产物与载体的连接第35-36页
       ·转化反应第36页
       ·阳性克隆的获得第36页
     ·质粒提取第36-37页
     ·测序第37-39页
       ·DNA测序的实验操作第37-38页
       ·.2 上机测序第38-39页
第三章 结果与分析第39-46页
   ·霜霉菌菌孢子的收集和接种第39页
   ·总RNA的提取和mRNA的分离第39-40页
   ·cDNA合成以及cDNA酶切效果分析第40-41页
   ·消减PCR结果第41页
   ·PCR产物纯化第41页
   ·抑制消减文库的建立和阳性克隆的筛选第41-42页
     ·连接和转化效率第41-42页
     ·阳性克隆的筛选第42页
   ·消减文库的分析第42-43页
   ·BLAST的分析结果第43-46页
第四章 讨论第46-49页
   ·葡萄抗霜霉病基因抑制消减文库EST序列的获得第46-47页
     ·RNA样本的制备第46页
     ·抑制消减杂交后PCR产物的纯化第46页
       ·胶回收法第46页
       ·试剂纯化法第46页
     ·阳性克隆的鉴定第46-47页
   ·EST序列分析第47-48页
   ·关于抗病基因的克隆和抑制消减杂交技术第48-49页
第五章 结论第49-50页
参考文献第50-54页
附表第54-62页
英文缩略词第62-63页
致谢第63-64页
作者简介第64页

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