| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| VAP-33研究现状 | 第9-12页 |
| 第一部分 VAP-33在DCS细胞及DC细胞中的表达及功能研究 | 第12-38页 |
| 摘要 | 第12-13页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 实验材料 | 第14-18页 |
| 一、细胞系 | 第14页 |
| 二、菌株 | 第14页 |
| 三、抗体 | 第14-15页 |
| 四、培养基及主要试剂 | 第15页 |
| 五、主要储备液及工作液的配制 | 第15-16页 |
| 六、主要耗材 | 第16页 |
| 七、主要仪器 | 第16-18页 |
| 实验方法 | 第18-26页 |
| 一、细胞培养 | 第18页 |
| 二、蛋白的提取 | 第18-19页 |
| 三、免疫沉淀(IP) | 第19页 |
| 四、BCA法检测蛋白浓度 | 第19-20页 |
| 五、Western Blotting | 第20-21页 |
| 六、质谱样品准备及结果搜索数据库 | 第21-22页 |
| 七、间接免疫荧光 | 第22页 |
| 八、石蜡组织切片间接免疫组织化学(VAP-33) | 第22-23页 |
| 九、体外侵袭实验——Transwell | 第23-24页 |
| 十、克隆形成率测定 | 第24页 |
| 十一、伊红—苏木素染色(HE染色) | 第24页 |
| 十二、抗原刺激DCS细胞成熟 | 第24-25页 |
| 十三、细胞吞噬能力检测 | 第25页 |
| 十四、胰岛素诱导葡萄糖转运 | 第25-26页 |
| 实验结果 | 第26-35页 |
| 一、VAP-33蛋白在DCS细胞及DC细胞中的表达 | 第26-28页 |
| 1、DCS膜蛋白免疫沉淀及Western Blotting结果: | 第26页 |
| 2、切取SDS-PAGE胶上32kDa左右条带,质谱分析结果: | 第26-27页 |
| 3、VAP-33在DCS细胞中的表达: | 第27页 |
| 4、VAP-33在具有不同转移潜能的肿瘤细胞(DCS、DD1、DG6)中的表达: | 第27-28页 |
| 5、VAP-33在淋巴结滤泡树突状细胞中的表达: | 第28页 |
| 二、VAP-33与DCS细胞体外侵袭转移及成瘤能力的关系 | 第28-30页 |
| 1、VAP-33蛋白对DCS细胞侵袭转移能力的影响: | 第28-29页 |
| 2、VAP-33蛋白对DCS细胞体外成瘤能力的影响 | 第29-30页 |
| 三、大分子抗原对DCS细胞功能的影响 | 第30-33页 |
| 1、抗原刺激后DCS细胞的形态变化: | 第30-31页 |
| 2、抗原刺激后DCS细胞中Id-1的表达变化: | 第31-32页 |
| 3、抗原刺激后DCS细胞的吞噬能力的变化: | 第32页 |
| 4、抗原刺激后DCS细胞中VAP-33的表达变化 | 第32-33页 |
| 四、VAP-33在GLUT-4运输中的作用 | 第33-35页 |
| 1、经胰岛素诱导后DCS细胞中VAP-33蛋白的表达: | 第33-35页 |
| 讨论 | 第35-37页 |
| 参考文献 | 第37-38页 |
| 第二部分 VAP-33基因的克隆与表达 | 第38-57页 |
| 实验材料 | 第38-42页 |
| 一、细胞系 | 第38页 |
| 二、菌株 | 第38页 |
| 三、质粒 | 第38页 |
| 四、培养基及主要试剂 | 第38-39页 |
| 五、目的基因序列及RT-PCR引物 | 第39-40页 |
| 六、主要储备液及工作液的配制 | 第40-41页 |
| 七、主要耗材 | 第41页 |
| 八、主要仪器 | 第41-42页 |
| 实验方法 | 第42-51页 |
| 一、质粒转化、扩增 | 第42页 |
| 二、质粒提取 | 第42-43页 |
| 三、细胞总RNA的提取 | 第43-44页 |
| 四、逆转录为cDNA的第一链 | 第44-46页 |
| 五、聚合酶链式反应(PCR) | 第46页 |
| 六、琼脂糖凝胶电泳检测引物的特异性 | 第46-47页 |
| 七、VAP-33基因的克隆与表达: | 第47-50页 |
| 八、质粒转染细胞 | 第50-51页 |
| 实验结果 | 第51-56页 |
| 一、VAP-33-pECFP-N1重组载体的构建 | 第51-56页 |
| 讨论 | 第56-57页 |
| 小结 | 第57-58页 |
| 附录一 | 第58-63页 |
| 附录二 | 第63-64页 |
| 附录三 | 第64-66页 |
| 附录四 | 第66-67页 |
| 附录五 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 简历 | 第70-71页 |
