| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 1 引言 | 第8-15页 |
| ·ASICs结构、分布及电生理特性 | 第8-9页 |
| ·ASICs的调节 | 第9页 |
| ·缺血性脑损伤的机制研究 | 第9-13页 |
| ·兴奋性中毒和酸中毒 | 第9-11页 |
| ·脑缺血过程中谷氨酸受体和ASICs的协同作用 | 第11-13页 |
| ·缺血性脑中风的药物治疗策略 | 第13-14页 |
| ·立题依据 | 第14-15页 |
| 2 材料 | 第15-18页 |
| ·菌种和表达载体 | 第15页 |
| ·PCR引物 | 第15页 |
| ·细胞株和动物材料 | 第15-16页 |
| ·主要化学试剂 | 第16-17页 |
| ·提质粒的主要试剂 | 第16页 |
| ·提细胞RNA的主要试剂 | 第16页 |
| ·磷酸盐缓冲液 | 第16页 |
| ·测钙敏感的荧光蛋白溶液 | 第16-17页 |
| ·测细胞毒性(LDH释放法)溶液 | 第17页 |
| ·主要实验仪器和耗材 | 第17-18页 |
| 3 实验方法 | 第18-26页 |
| ·分子生物学实验方法 | 第18-22页 |
| ·真核表达载体的构建(DNA的重组和质粒构建) | 第18-19页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒的方法 | 第19页 |
| ·质粒大量制备的方法 | 第19-20页 |
| ·哺乳动物细胞总RNA的提取和反转录 | 第20-21页 |
| ·PCR | 第21-22页 |
| ·PCR纯化 | 第22页 |
| ·细胞生物学实验方法 | 第22-25页 |
| ·真核生物细胞的瞬时转染和稳定转染(脂质体转染法) | 第22-23页 |
| ·培养细胞的免疫荧光染色 | 第23页 |
| ·钙敏感的荧光蛋白的检测 | 第23-24页 |
| ·钙敏感的荧光染料的检测 | 第24-25页 |
| ·细胞毒性检测(LDH释放法) | 第25-26页 |
| 4 结果 | 第26-45页 |
| ·真核表达质粒pcDNA3.1/Zeocin-mASIC1a-myc-His的构建 | 第26-30页 |
| ·真核表达质粒pCDNA3.1/Myc-His-mASIC1a的构建 | 第26-27页 |
| ·真核表达质粒pcDNA3.1/myc-His-mASIC1a的鉴定 | 第27-28页 |
| ·质粒pcDNA3.1/Zeocin-mASIC1a-myc-His的构建 | 第28-30页 |
| ·ASIC1a在体外细胞系中的分布 | 第30-32页 |
| ·真核共表达质粒pBudCE4.1-mP11-mASIC1a的构建 | 第32-34页 |
| ·共表达质粒pBudCE4.1-mP11的构建 | 第32-33页 |
| ·共表达质粒pBudCE4.1-mP11-mASIC1a的构建 | 第33页 |
| ·共表达质粒pBudCE4.1-mP11-mASIC1a的鉴定 | 第33-34页 |
| ·共表达mP11和mASIC1a在体外细胞系中的分布 | 第34-38页 |
| ·共表达mP11和mASIC1a在体外细胞系中的鉴定 | 第34-35页 |
| ·构建共表达mP11和mASIC1a的稳定细胞系 | 第35-38页 |
| ·ASIC1a在体外细胞系中的功能检测 | 第38-45页 |
| ·应用FluoStar Optima多功能酶标仪测定ASIC1a通道活性 | 第38-40页 |
| ·应用钙敏感的荧光染料检测 | 第40-41页 |
| ·应用细胞毒性检测 | 第41-45页 |
| 5 讨论 | 第45-47页 |
| 6 主要创新点 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
