中文摘要 | 第1-9页 |
Abstract | 第9-13页 |
英文缩略词表 | 第13-15页 |
前言 | 第15-20页 |
第一部分 姜黄素衍生物 C086 对人白血病细胞增殖的抑制作用 | 第20-48页 |
1 材料与方法 | 第20-28页 |
·材料 | 第20-24页 |
·细胞系 | 第20页 |
·药品与主要试剂 | 第20-21页 |
·主要仪器 | 第21-22页 |
·主要试剂的配制 | 第22-24页 |
·方法 | 第24-28页 |
·细胞培养 | 第24页 |
·MTT 法检测药物对细胞增殖的影响 | 第24页 |
·瑞氏-吉姆萨染色观察药物对细胞形态的影响 | 第24页 |
·细胞收集、样品制备与蛋白定量 | 第24-25页 |
·免疫印迹分析(Western blotting Analysis)检测细胞蛋白表达量 | 第25-26页 |
·免疫荧光检测细胞Bcr/Abl 蛋白表达的改变 | 第26页 |
·AO-EB 染色观察药物对细胞凋亡影响 | 第26-27页 |
·分光光度法检测Caspase 3 和Caspase 9 的活性 | 第27页 |
·联苯胺染色法检测药物对K562 细胞红系分化的影响 | 第27-28页 |
·数据及图片处理 | 第28页 |
2 结果 | 第28-39页 |
·MTT 法检测药物对白血病细胞增殖的影响 | 第28-30页 |
·瑞氏-吉姆萨染色观察药物对细胞形态的影响 | 第30-31页 |
·C086 对细胞增殖、凋亡相关信号分子表达的影响 | 第31-35页 |
·免疫印迹分析检测C086 对细胞Erk_1、Erk_2、p-Erk、Akt、p-Akt、PKC、C-myc、Src 及p-Src 蛋白含量的影响 | 第31-32页 |
·C086 对细胞Bcr/Abl 表达的影响 | 第32-34页 |
·免疫印迹分析检测C086 对细胞Bcl-2 和 Bax 蛋白含量的影响 | 第34-35页 |
·AO-EB 染色观察药物对K562 细胞凋亡影响 | 第35-36页 |
·C086 对K562 细胞Caspase3、Caspase9 活性影响 | 第36-38页 |
·分光光度法检测Caspase 3 和Caspase 9 的活性 | 第36-37页 |
·免疫印迹分析检测C086 对K562 细胞Caspase 3 和Caspase 9 蛋白含量的影响 | 第37-38页 |
·免疫印迹分析检测C086 对K562 细胞Fas 和Fasl 蛋白含量的影响 | 第38页 |
·免疫印迹分析检测C086 对K562 细胞p53 蛋白含量的影响 | 第38页 |
·联苯胺染色法检测C086 对K562 细胞红系分化的影响 | 第38-39页 |
3 讨论 | 第39-47页 |
4 小结 | 第47-48页 |
第二部分 姜黄素及其衍生物 C086 对白血病细胞中Hsp90 分子伴侣功能的影响 | 第48-79页 |
1 材料和方法 | 第48-57页 |
·材料 | 第48-50页 |
·细胞系 | 第48页 |
·菌种及质粒 | 第48页 |
·药品与主要试剂 | 第48-49页 |
·主要仪器 | 第49页 |
·主要试剂的配制 | 第49-50页 |
·方法 | 第50-57页 |
·细胞培养 | 第50页 |
·免疫共沉淀 | 第50-51页 |
·应用Piper Phosphate Assay Kit 检测药物对K562 细胞中Hsp90 的ATPase 活性的影响 | 第51-52页 |
·免疫组化检测药物对细胞中Hsp70 表达的影响 | 第52-53页 |
·Realtime PCR 检测药物对K562 细胞中HSP90 和HSP70 基因mRNA 水平影响 | 第53-56页 |
·GST-Hsp90-His 的表达与纯化 | 第56页 |
·Hsp90 N 端蛋白(NHsp90)表达与纯化 | 第56-57页 |
·荧光光谱实验 | 第57页 |
·数据及图片处理 | 第57页 |
2 结果 | 第57-73页 |
·Cur 和C086 对白血病细胞中Hsp90、Hsp70、p23 和p60~(Hop) 蛋白的影响 | 第57-63页 |
·免疫印迹分析检测Cur 和C086 对白血病细胞中Hsp90、Hsp70、p23 和p60~(Hop)蛋白含量的影响 | 第57-59页 |
·免疫组化检测Cur 和C086 对白血病细胞中Hsp70 表达的影响 | 第59-61页 |
·Realtime PCR 检测C086 对K562 细胞中HSP90 和HSP70 基因mRNA 水平影响 | 第61-63页 |
·Cur 和C086 对白血病细胞中Bcr/Abl/Hsp90/Hsp70/p23/p60~(Hop) 蛋白结合的影响 | 第63-66页 |
·Cur 和C086 对白血病细胞中Hsp90 与Hsp70/p23/p60~(Hop) 蛋白结合的影响 | 第63-64页 |
·Cur 和C086 对白血病细胞中Bcrr/Abl 与 Hsp90/Hsp70/p23/p60~(Hop)蛋白结合的影响 | 第64-66页 |
·Cur 和C086 与异源表达的Hsp90 和Hsp90 N 端蛋白(NHsp90)的相互作用 | 第66-72页 |
·异源Hsp90 和NHsp90 的表达和纯化 | 第67页 |
·Cur 和C086 对Hsp90 内源荧光的猝灭作用 | 第67-69页 |
·Cur 对NHsp90 内源荧光的猝灭作用 | 第69-72页 |
·药物对K562 细胞中Hsp90 的ATPase 活性的影响 | 第72-73页 |
3 讨论 | 第73-78页 |
4 小结 | 第78-79页 |
第三部分 姜黄素衍生物C086对K562细胞裸鼠异种移植瘤的作用及相关机制研究 | 第79-92页 |
1 材料与方法 | 第79-83页 |
·材料 | 第79-81页 |
·细胞系 | 第79页 |
·动物 | 第79页 |
·主要药品试剂 | 第79-80页 |
·主要仪器 | 第80页 |
·主要试剂配制 | 第80-81页 |
·方法 | 第81-83页 |
·细胞培养 | 第81页 |
·裸鼠异种移植瘤模型的建立 | 第81页 |
·实验分组及给药方案 | 第81页 |
·标本收集 | 第81页 |
·肝肾功能及电解质检测 | 第81-82页 |
·肿瘤组织常规HE 染色 | 第82页 |
·肿瘤组织冰冻切片 | 第82页 |
·肿瘤组织免疫荧光检测Bcr/Abl 蛋白表达 | 第82-83页 |
·免疫印迹分析检测肿瘤组织中蛋白表达 | 第83页 |
·数据处理 | 第83页 |
2 结果 | 第83-89页 |
·裸鼠生长及成瘤情况 | 第83页 |
·C086 对K562 细胞裸鼠异种移植瘤生长的抑制作用 | 第83-85页 |
·C086 对对荷瘤裸鼠肝肾功能及血电解质的影响 | 第85-86页 |
·C086 对肿瘤组织形态结构的影响 | 第86-87页 |
·免疫荧光检测C086 对肿瘤组织Bcr/Abl 蛋白表达的影响 | 第87-88页 |
·免疫印迹检测C086 对肿瘤组织中的Erk_1、Erk_2、p-Erk 和 C-myc 蛋白表达的影响 | 第88页 |
·免疫印迹检测C086 对肿瘤组织中的Hsp90 和Hsp70 蛋白表达的影响 | 第88-89页 |
3 讨论 | 第89-91页 |
4 小结 | 第91-92页 |
结论 | 第92-93页 |
参考文献 | 第93-102页 |
综述 | 第102-115页 |
参考文献 | 第112-115页 |
致谢 | 第115页 |