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姜黄素及其衍生物C086抑制人白血病细胞增殖与阻断Hsp90伴侣功能的关系

中文摘要第1-9页
Abstract第9-13页
英文缩略词表第13-15页
前言第15-20页
第一部分 姜黄素衍生物 C086 对人白血病细胞增殖的抑制作用第20-48页
 1 材料与方法第20-28页
   ·材料第20-24页
     ·细胞系第20页
     ·药品与主要试剂第20-21页
     ·主要仪器第21-22页
     ·主要试剂的配制第22-24页
   ·方法第24-28页
     ·细胞培养第24页
     ·MTT 法检测药物对细胞增殖的影响第24页
     ·瑞氏-吉姆萨染色观察药物对细胞形态的影响第24页
     ·细胞收集、样品制备与蛋白定量第24-25页
     ·免疫印迹分析(Western blotting Analysis)检测细胞蛋白表达量第25-26页
     ·免疫荧光检测细胞Bcr/Abl 蛋白表达的改变第26页
     ·AO-EB 染色观察药物对细胞凋亡影响第26-27页
     ·分光光度法检测Caspase 3 和Caspase 9 的活性第27页
     ·联苯胺染色法检测药物对K562 细胞红系分化的影响第27-28页
   ·数据及图片处理第28页
 2 结果第28-39页
   ·MTT 法检测药物对白血病细胞增殖的影响第28-30页
   ·瑞氏-吉姆萨染色观察药物对细胞形态的影响第30-31页
   ·C086 对细胞增殖、凋亡相关信号分子表达的影响第31-35页
     ·免疫印迹分析检测C086 对细胞Erk_1、Erk_2、p-Erk、Akt、p-Akt、PKC、C-myc、Src 及p-Src 蛋白含量的影响第31-32页
     ·C086 对细胞Bcr/Abl 表达的影响第32-34页
     ·免疫印迹分析检测C086 对细胞Bcl-2 和 Bax 蛋白含量的影响第34-35页
   ·AO-EB 染色观察药物对K562 细胞凋亡影响第35-36页
   ·C086 对K562 细胞Caspase3、Caspase9 活性影响第36-38页
     ·分光光度法检测Caspase 3 和Caspase 9 的活性第36-37页
     ·免疫印迹分析检测C086 对K562 细胞Caspase 3 和Caspase 9 蛋白含量的影响第37-38页
   ·免疫印迹分析检测C086 对K562 细胞Fas 和Fasl 蛋白含量的影响第38页
   ·免疫印迹分析检测C086 对K562 细胞p53 蛋白含量的影响第38页
   ·联苯胺染色法检测C086 对K562 细胞红系分化的影响第38-39页
 3 讨论第39-47页
 4 小结第47-48页
第二部分 姜黄素及其衍生物 C086 对白血病细胞中Hsp90 分子伴侣功能的影响第48-79页
 1 材料和方法第48-57页
   ·材料第48-50页
     ·细胞系第48页
     ·菌种及质粒第48页
     ·药品与主要试剂第48-49页
     ·主要仪器第49页
     ·主要试剂的配制第49-50页
   ·方法第50-57页
     ·细胞培养第50页
     ·免疫共沉淀第50-51页
     ·应用Piper Phosphate Assay Kit 检测药物对K562 细胞中Hsp90 的ATPase 活性的影响第51-52页
     ·免疫组化检测药物对细胞中Hsp70 表达的影响第52-53页
     ·Realtime PCR 检测药物对K562 细胞中HSP90 和HSP70 基因mRNA 水平影响第53-56页
     ·GST-Hsp90-His 的表达与纯化第56页
     ·Hsp90 N 端蛋白(NHsp90)表达与纯化第56-57页
     ·荧光光谱实验第57页
   ·数据及图片处理第57页
 2 结果第57-73页
   ·Cur 和C086 对白血病细胞中Hsp90、Hsp70、p23 和p60~(Hop) 蛋白的影响第57-63页
     ·免疫印迹分析检测Cur 和C086 对白血病细胞中Hsp90、Hsp70、p23 和p60~(Hop)蛋白含量的影响第57-59页
     ·免疫组化检测Cur 和C086 对白血病细胞中Hsp70 表达的影响第59-61页
     ·Realtime PCR 检测C086 对K562 细胞中HSP90 和HSP70 基因mRNA 水平影响第61-63页
   ·Cur 和C086 对白血病细胞中Bcr/Abl/Hsp90/Hsp70/p23/p60~(Hop) 蛋白结合的影响第63-66页
     ·Cur 和C086 对白血病细胞中Hsp90 与Hsp70/p23/p60~(Hop) 蛋白结合的影响第63-64页
     ·Cur 和C086 对白血病细胞中Bcrr/Abl 与 Hsp90/Hsp70/p23/p60~(Hop)蛋白结合的影响第64-66页
   ·Cur 和C086 与异源表达的Hsp90 和Hsp90 N 端蛋白(NHsp90)的相互作用第66-72页
     ·异源Hsp90 和NHsp90 的表达和纯化第67页
     ·Cur 和C086 对Hsp90 内源荧光的猝灭作用第67-69页
     ·Cur 对NHsp90 内源荧光的猝灭作用第69-72页
   ·药物对K562 细胞中Hsp90 的ATPase 活性的影响第72-73页
 3 讨论第73-78页
 4 小结第78-79页
第三部分 姜黄素衍生物C086对K562细胞裸鼠异种移植瘤的作用及相关机制研究第79-92页
 1 材料与方法第79-83页
   ·材料第79-81页
     ·细胞系第79页
     ·动物第79页
     ·主要药品试剂第79-80页
     ·主要仪器第80页
     ·主要试剂配制第80-81页
   ·方法第81-83页
     ·细胞培养第81页
     ·裸鼠异种移植瘤模型的建立第81页
     ·实验分组及给药方案第81页
     ·标本收集第81页
     ·肝肾功能及电解质检测第81-82页
     ·肿瘤组织常规HE 染色第82页
     ·肿瘤组织冰冻切片第82页
     ·肿瘤组织免疫荧光检测Bcr/Abl 蛋白表达第82-83页
     ·免疫印迹分析检测肿瘤组织中蛋白表达第83页
   ·数据处理第83页
 2 结果第83-89页
   ·裸鼠生长及成瘤情况第83页
   ·C086 对K562 细胞裸鼠异种移植瘤生长的抑制作用第83-85页
   ·C086 对对荷瘤裸鼠肝肾功能及血电解质的影响第85-86页
   ·C086 对肿瘤组织形态结构的影响第86-87页
   ·免疫荧光检测C086 对肿瘤组织Bcr/Abl 蛋白表达的影响第87-88页
   ·免疫印迹检测C086 对肿瘤组织中的Erk_1、Erk_2、p-Erk 和 C-myc 蛋白表达的影响第88页
   ·免疫印迹检测C086 对肿瘤组织中的Hsp90 和Hsp70 蛋白表达的影响第88-89页
 3 讨论第89-91页
 4 小结第91-92页
结论第92-93页
参考文献第93-102页
综述第102-115页
 参考文献第112-115页
致谢第115页

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