| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACTS | 第9-19页 |
| 前言 | 第19-22页 |
| 第一部分 Tat 突变体蛋白原核表达载体的构建及蛋白的表达纯化和鉴定 | 第22-68页 |
| 0 前言 | 第22-23页 |
| 1 实验材料 | 第23-28页 |
| ·实验用菌种 | 第23页 |
| ·实验用质粒 | 第23页 |
| ·主要试剂与材料 | 第23-24页 |
| ·常用缓冲液及其它溶液的配制 | 第24-26页 |
| ·主要仪器 | 第26-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-35页 |
| ·Tat 上heparin 结合位点的计算机模拟 | 第28-29页 |
| ·Tat 蛋白突变体的制备 | 第29-34页 |
| ·Tat 突变体目的片段的制备 | 第29-30页 |
| ·Tat 蛋白突变体原核表达质粒的构建 | 第30-33页 |
| ·Tat 突变体蛋白的表达及纯化 | 第33-34页 |
| ·蛋白鉴定 | 第34-35页 |
| ·样品处理 | 第34-35页 |
| ·LC | 第35页 |
| 3 实验结果 | 第35-65页 |
| ·分子对接预测了Tat 蛋白上肝素新结合位点 | 第35-37页 |
| ·Tat 蛋白突变体的制备 | 第37-52页 |
| ·Tat 突变体引物的设计 | 第37-39页 |
| ·Tat 突变体的PCR 扩增 | 第39-41页 |
| ·Tat 突变体PCR 产物以及pGEX-2T 载体的双酶切 | 第41页 |
| ·双酶切鉴定重组突变体质粒 | 第41-43页 |
| ·DNA 测序鉴定结果 | 第43-51页 |
| ·Tat 突变体蛋白的表达及纯化 | 第51-52页 |
| ·蛋白鉴定 | 第52-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 5 小结 | 第67-68页 |
| 第二部分 Tat 蛋白上肝素结合位点的确定 | 第68-96页 |
| 0 前言 | 第68-70页 |
| 1 实验材料 | 第70-71页 |
| ·主要试剂与材料 | 第70页 |
| ·实验仪器 | 第70-71页 |
| 2 实验方法 | 第71-73页 |
| ·Heparin 糖生物芯片的制备 | 第71-72页 |
| ·肝素-己二胺的合成 | 第71页 |
| ·肝素-己二胺-生物素的合成 | 第71页 |
| ·肝素-己二胺-生物素在传感器表面的固定 | 第71-72页 |
| ·肝素及内源性糖胺聚糖类物质（GAGs）对GST-Tat 及其突变体与芯片肝素结合的抑制作用 | 第72-73页 |
| ·GST-Tat 与芯片肝素结合的浓度的确定 | 第72页 |
| ·GST-Tat 及其突变体与肝素结合能力的检测 | 第72页 |
| ·GST-Tat 及其突变体与肝素结合的动力学参数 | 第72页 |
| ·肝素及其他 GAGs 对 GST-Tat、GST-Tat_((G48-R57)A)、GST-Tat_(K(12,41)A/R78A)与芯片肝素结合的影响 | 第72-73页 |
| 3 实验结果 | 第73-92页 |
| ·GST-Tat 及其突变体与芯片肝素结合能力的比较 | 第73-86页 |
| ·GST-Tat 实验浓度的确定 | 第73-74页 |
| ·GST-Tat 及其突变体与Heparin 结合能力的比较 | 第74-75页 |
| ·GST-Tat 及其突变体与Heparin 结合的动力学研究 | 第75-86页 |
| ·Heparin 及其他内源性GAGs 对GST-Tat 及其突变体与芯片Heparin 结合的抑制作用 | 第86-92页 |
| 4 讨论 | 第92-95页 |
| 5 小结 | 第95-96页 |
| 第三部分 KKR 区在 Tat 蛋白功能中作用的研究 | 第96-107页 |
| 0 前言 | 第96-97页 |
| 1 实验材料 | 第97-98页 |
| ·试剂与材料 | 第97页 |
| ·细胞和细胞培养 | 第97-98页 |
| ·主要仪器及数据处理软件 | 第98页 |
| 2 实验方法 | 第98-99页 |
| ·内化试验 | 第98-99页 |
| ·黏附实验 | 第99页 |
| ·整合素活化试验 | 第99页 |
| 3 结果 | 第99-104页 |
| ·KKR 区不影响Tat 蛋白的内化功能 | 第99-101页 |
| ·KKR 区通过与细胞膜 HSPG 结合,利于 Tat介导的整合素活化,进而促进卡波氏肉瘤细胞的粘附 | 第101-104页 |
| 4 讨论 | 第104-106页 |
| 5 小结 | 第106-107页 |
| 结论与创新 | 第107-109页 |
| 一、结论 | 第107页 |
| 二、主要创新之处 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-115页 |
| 综述1、肝素/硫酸乙酰肝素结合蛋白研究方法进展 | 第115-126页 |
| 综述2、SPR 技术在海洋糖生物学研究中的应用 | 第126-135页 |
| 致谢 | 第135-137页 |
| 发表的学术论文 | 第137页 |
