| 缩略词 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-13页 |
| ABSTRACT | 第13-19页 |
| 前言 | 第19-23页 |
| 第一部分 体外重构猪甲状腺滤泡实验模型的构建 | 第23-63页 |
| 实验一:体外重构猪甲状腺滤泡的构建及鉴定 | 第23-46页 |
| 材料与方法 | 第23-31页 |
| 1. 材料 | 第23-25页 |
| ·主要实验仪器 | 第23-24页 |
| ·主要实验材料、试剂及配制 | 第24-25页 |
| 2. 方法 | 第25-30页 |
| ·猪甲状腺原代单层细胞培养及重构滤泡诱导 | 第25-26页 |
| ·猪体外重构滤泡结构形态学鉴定 | 第26-30页 |
| 3. 统计学分析 | 第30-31页 |
| 结果 | 第31-41页 |
| 1. 甲状腺滤泡结构的形态学观察 | 第31-38页 |
| ·普通倒置显微镜观察 | 第31-33页 |
| ·相差显微镜下观察 | 第33-36页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 | 第36-38页 |
| 2. 甲状腺滤泡结构的功能学鉴定 | 第38-41页 |
| ·甲状腺滤泡腔的 TG 储备 | 第38-39页 |
| ·培养上清液中 FT3、FT4 的分泌 | 第39-41页 |
| 讨论 | 第41-46页 |
| 实验二：重构滤泡与单层细胞甲 | 第46-62页 |
| 材料与方法 | 第46-52页 |
| 1. 材料 | 第46-47页 |
| ·主要实验仪器 | 第46-47页 |
| ·主要实验材料、试剂及配制 | 第47页 |
| 2. 方法 | 第47-52页 |
| ·重构滤泡的诱导及单层细胞培养 | 第47页 |
| ·分组及药物干预 | 第47-48页 |
| ·Real-Time RT-PCR | 第48-52页 |
| 结果 | 第52-58页 |
| 1. 提取的总 RNA 纯度与完整性鉴定 | 第52页 |
| 2. PCR 引物的标准曲线及熔解曲线 | 第52-58页 |
| ·PCR 引物标准曲线 | 第52-53页 |
| ·PCR 引物的熔解曲线 | 第53-54页 |
| ·PCR 产物电泳 | 第54-55页 |
| ·不同碘浓度干预下重构滤泡组及单层细胞组甲状腺特异性基因TSHr、NIS、TPO、TG mRNA 表达的相对定量测定 | 第55页 |
| ·不同碘浓度干预下甲状腺转录因子 TTF-1、PAX8 mRNA 表达的相对定量测定 | 第55-58页 |
| 讨论 | 第58-62页 |
| 第一部分小结 | 第62-63页 |
| 第二部分 碘对甲状腺滤泡功能的调控作用 | 第63-74页 |
| 材料与方法 | 第63-66页 |
| 1. 材料 | 第63-64页 |
| ·主要实验仪器 | 第63-64页 |
| ·主要实验材料、试剂及配制 | 第64页 |
| 2. 方法 | 第64-65页 |
| ·重构滤泡的诱导 | 第64页 |
| ·分组及药物干预 | 第64-65页 |
| ·Real-Time PCR 检测重构甲状腺滤泡在不同碘浓度干预下NIS、TPO、TG 、NIS2 mRNA 表达 | 第65页 |
| ·RIA 法检测重构甲状腺滤泡在不同碘浓度干预下培养上清液 FT3、FT4 分泌 | 第65页 |
| 3. 统计学分析 | 第65-66页 |
| 结果 | 第66-69页 |
| 1. 提取的总 RNA 纯度与完整性鉴定 | 第66页 |
| 2. NIS2 PCR 引物的标准曲线及熔解曲线 | 第66-67页 |
| ·NIS2 引物标准曲线 | 第66页 |
| ·NIS2 引物熔解曲线 | 第66-67页 |
| 3. 重构甲状腺滤泡在不同碘浓度干预下培养上清液 FT3、FT4 分泌变化 | 第67页 |
| 4. 重构甲状腺滤泡在不同碘浓度干预下 NIS、TPO、TG 、NIS2 mRNA表达的相对定量检测 | 第67-69页 |
| 讨论 | 第69-73页 |
| 第二部分小结 | 第73-74页 |
| 第三部分 碘甲状腺滤泡功能调控作用的分子机制研究 | 第74-113页 |
| 实验一 碘对重构滤泡 TTF-1、PAX8、TSHr 表达的调控作用 | 第74-86页 |
| 材料与方法 | 第74-80页 |
| 1. 材料 | 第74-76页 |
| ·主要实验仪器 | 第74-75页 |
| ·主要实验材料、试剂及配制 | 第75-76页 |
| 2. 方法 | 第76-79页 |
| ·重构滤泡的诱导 | 第76页 |
| ·分组及药物干预 | 第76-77页 |
| ·Real-Time RT-PCR | 第77页 |
| ·Western-blot 检测 | 第77-79页 |
| 3. 统计学分析 | 第79-80页 |
| 结果 | 第80-83页 |
| 1. 总 RNA 的纯度、浓度及完整性检测 | 第80页 |
| 2. 重构滤泡在高碘及低碘干预下 TTF-1、PAX8、TSHr mRNA 表达的相对定量检测 | 第80-81页 |
| 3. 重构甲状腺滤泡在高碘及低碘干预下 TTF-1、PAX8、TSHr 蛋白合成检测 | 第81页 |
| 4. TTF-1 蛋白合成的碘浓度依赖性研究 | 第81-83页 |
| 讨论 | 第83-86页 |
| 实验二：滤泡腔 TG 的碘化度对重构滤泡TTF-1、PAX8、TSHr 表达的调控作用 | 第86-99页 |
| 材料与方法 | 第86-90页 |
| 1. 材料 | 第86-89页 |
| ·主要实验仪器 | 第86-87页 |
| ·主要实验材料、试剂及配制 | 第87-89页 |
| 2. 方法 | 第89页 |
| ·重构滤泡的诱导 | 第89页 |
| ·分组及药物干预 | 第89页 |
| ·滤泡腔 TG 的提取、含量及碘化度检测 | 第89页 |
| ·Real-Time RT-PCR | 第89页 |
| ·Western-blot 检测 | 第89页 |
| 3. 统计学分析 | 第89-90页 |
| 结果 | 第90-95页 |
| 1. 各组别滤泡腔 TG 碘化度测定 | 第90-91页 |
| 2. 各组别 TTF-1、PAX8、TSHr mRNA 表达的相对定量测定 | 第91-92页 |
| 3. 各组别 TTF-1、PAX8、TSHr 蛋白合成的检测 | 第92页 |
| 4. 高碘及甲硫咪唑不同干预顺序重构滤泡 TTF-1、PAX8、TSHr mRNA表达相对定量测定 | 第92-93页 |
| 5. 各组别 NIS、TPO、TG 、NIS2 mRNA 表达的相对定量测定 | 第93-95页 |
| 讨论 | 第95-99页 |
| 实验三：垂体 TSH/TSHr 信号通路对TTF-1、TSHr 表达的调控作用 | 第99-112页 |
| 材料与方法 | 第99-103页 |
| 1. 材料 | 第99-101页 |
| ·主要实验仪器 | 第99页 |
| ·主要实验材料、试剂及配制 | 第99-101页 |
| 2. 方法 | 第101页 |
| ·重构滤泡的诱导及单层细胞培养 | 第101页 |
| ·分组及药物干预 | 第101页 |
| ·滤泡腔 TG 的提取、含量及碘化度检测 | 第101页 |
| ·Real-Time RT-PCR | 第101页 |
| ·Western-blot 检测 | 第101页 |
| 3. 统计学分析 | 第101-103页 |
| 结果 | 第103-107页 |
| 1. 信号阻断剂干预下重构滤泡 TTF-1、TSHr、NIS、NIS2 基因表达的相对定量测定 | 第103-104页 |
| 2. 信号阻断剂干预下重构滤泡 TTF-1、TSHr 蛋白水平检测 | 第104-105页 |
| 3. 信号阻断剂干预下重构滤泡形态学变化的初步观察 | 第105-107页 |
| 讨论 | 第107-112页 |
| 第三部分小结 | 第112-113页 |
| 全文总结 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-129页 |
| 综述 甲状腺功能的调控作用及调控机制 | 第129-150页 |
| 一、碘对甲状腺功能的调控作用 | 第129-131页 |
| 二、碘调控甲状腺功能的分子机制 | 第131-132页 |
| 三、中枢信号对甲状腺功能的调控作用 | 第132-135页 |
| 四、甲状腺功能调控研究的实验模型 | 第135-139页 |
| 五、展望 | 第139-140页 |
| 参考文献 | 第140-150页 |
| 致谢 | 第150-151页 |
