| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1. 朱砂叶螨的抗药性 | 第11-13页 |
| ·害虫害螨的抗药性机制 | 第11-12页 |
| ·抗性的遗传 | 第12-13页 |
| 2. 昆虫酯酶的研究进展 | 第13-16页 |
| ·昆虫(螨)乙酰胆碱酯酶 | 第13-14页 |
| ·昆虫(螨)羧酸酯酶的研究进展 | 第14-16页 |
| 3. 基因定量表达的检测技术 | 第16-19页 |
| 引言 | 第19-21页 |
| 第二章 基于实时荧光定量PCR的朱砂叶螨内参基因的筛选 | 第21-41页 |
| 1 材料与方法 | 第21-29页 |
| ·供试朱砂叶螨 | 第21-22页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第22页 |
| ·常用储备液及培养基的制备 | 第22-23页 |
| ·朱砂叶螨总RNA的提取 | 第23页 |
| ·朱砂叶螨候选内参基因的克隆 | 第23-26页 |
| ·基于实时荧光定量PCR的内参基因引物的设计 | 第26-27页 |
| ·朱砂叶螨无DNA污染的总RNA的获得 | 第27-28页 |
| ·Real-time RT-PCR条件的优化 | 第28页 |
| ·熔解曲线分析 | 第28页 |
| ·标准曲线的建立 | 第28-29页 |
| ·内参基因的Real-time RT-PCR检测 | 第29页 |
| ·利用geNorm软件和NormFinder软件进行数据分析 | 第29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-39页 |
| ·朱砂叶螨不同品系、不同螨态无DNA污染的总RNA的获得 | 第29-30页 |
| ·候选内参基因cDNA电泳图 | 第30-33页 |
| ·标准曲线及熔解曲线分析 | 第33-35页 |
| ·geNorm和NormFinder软件分析 | 第35-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 酯酶基因TCE1和TCE2在朱砂叶螨体内的表达特征 | 第41-51页 |
| 第一节 朱砂叶螨不同螨态中酯酶基因mRNA的表达研究 | 第41-44页 |
| 1 材料与方法 | 第41-42页 |
| ·供试朱砂叶螨 | 第41页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第41页 |
| ·引物设计及合成 | 第41页 |
| ·无DNA污染的总RNA提取及其单链cDNA的合成 | 第41-42页 |
| ·不同抗性螨态酯酶mRNA定量检测 | 第42页 |
| ·数据分析 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-43页 |
| ·朱砂叶螨不同螨态无DNA污染的总RNA的获得 | 第42-43页 |
| ·不同螨态酯酶表达量的测定 | 第43页 |
| 3 小结与讨论 | 第43-44页 |
| 第二节 朱砂叶螨不同品系酯酶基因mRNA表达研究 | 第44-46页 |
| 1 材料与方法 | 第44-45页 |
| ·供试朱砂叶螨 | 第44页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第44页 |
| ·引物设计及合成 | 第44页 |
| ·无DNA污染的总RNA提取及其单链cDNA的合成 | 第44页 |
| ·朱砂叶螨不同品系的酯酶mRNA定量检测 | 第44-45页 |
| ·数据分析 | 第45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-46页 |
| ·朱砂叶螨不同品系无DNA污染的总RNA的获得 | 第45页 |
| ·不同品系酯酶基因表达量的测定 | 第45-46页 |
| 3 小结与讨论 | 第46页 |
| 第三节 药剂诱导后朱砂叶螨酯酶mRNA表达研究 | 第46-51页 |
| 1 材料与方法 | 第46-47页 |
| ·供试朱砂叶螨 | 第46页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第46页 |
| ·引物设计及合成 | 第46页 |
| ·无DNA污染的总RNA提取及其单链cDNA的合成 | 第46-47页 |
| ·朱砂叶螨不同品系的酯酶mRNA定量检测 | 第47页 |
| ·数据分析 | 第47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-48页 |
| ·朱砂叶螨不同药剂诱导后无DNA污染的总RNA的获得 | 第47页 |
| ·不同药剂诱导后酯酶基因表达量的测定 | 第47-48页 |
| 3 小结与讨论 | 第48-51页 |
| 第四章 朱砂叶螨酯酶基因TCE1,TCE2的原核表达 | 第51-61页 |
| 1 材料与方法 | 第51-56页 |
| ·宿主菌与质粒 | 第51页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-59页 |
| ·酯酶TCE1,TCE2基因PCR扩增 | 第56页 |
| ·TCE1,TCE2基因克隆及测序 | 第56页 |
| ·原核表达载体质粒的构建与鉴定 | 第56-57页 |
| ·pET43a-TCE1,pET43a-TCE2的诱导表达 | 第57-58页 |
| ·Western Blot检测 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 结论与展望 | 第61-63页 |
| 1 主要结论 | 第61-62页 |
| 2 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录1 缩略词 | 第69-70页 |
| 附录2 硕士在读期间发表的论文 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
