| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩写词中英文对照表 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-25页 |
| ·AGEs概述 | 第11-14页 |
| ·RAGE及sRAGE概述 | 第14-17页 |
| ·毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第17-22页 |
| ·本研究的目的和研究内容 | 第22-25页 |
| 第二章 实验材料与设备 | 第25-33页 |
| ·主要设备和器材 | 第25页 |
| ·常用试剂 | 第25-26页 |
| ·实验菌株和细胞株 | 第26页 |
| ·培养基与抗生素 | 第26-27页 |
| ·实验试剂 | 第27-33页 |
| 第三章 试验方法与步骤 | 第33-45页 |
| ·PCR合成hsRAGE蛋白基因 | 第33-34页 |
| ·表达重组子的构建和序列分析 | 第34-37页 |
| ·重组质粒的抽提 | 第37-38页 |
| ·重组菌株的筛选 | 第38-41页 |
| ·重组蛋白的表达生产 | 第41-42页 |
| ·hsRAGE蛋白纯化 | 第42页 |
| ·重组hsRAGE蛋白的活性测定 | 第42-45页 |
| 第四章 实验结果 | 第45-55页 |
| ·PCR扩增hsRAGE蛋白基因 | 第45页 |
| ·重组质粒的菌落PCR鉴定和序列鉴定 | 第45-47页 |
| ·SDS-PAGE检测蛋白表达 | 第47页 |
| ·hsRAGE蛋白的Western blot鉴定 | 第47-48页 |
| ·不同温度及各个时间段的hsRAGE蛋白表达情况 | 第48页 |
| ·重组毕赤酵母的生长曲线测定(摇瓶水平) | 第48-49页 |
| ·重组毕赤酵母的生长曲线测定(发酵罐水平) | 第49页 |
| ·重组毕赤酵母在罐上各时间段SDS-PAGE | 第49-50页 |
| ·重组hsRAGE蛋白的分离和纯化 | 第50-52页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第52页 |
| ·AGE-HSA鉴定 | 第52-53页 |
| ·hsRAGE与AGE-HSA结合活性的ELISA检测 | 第53页 |
| ·Western blot鉴定NF-κB/p65蛋白的表达 | 第53-55页 |
| 第五章 讨论 | 第55-58页 |
| ·sRAGE蛋白表达系统的选择 | 第55页 |
| ·密码子偏好性的修改 | 第55页 |
| ·信号肽识别位点的设计 | 第55-56页 |
| ·关于发酵表达条件的优化 | 第56页 |
| ·关于Ni-NTA亲和层析 | 第56-57页 |
| ·hsRAGE重组蛋白生物活性测定 | 第57-58页 |
| 第六章 结论与展望 | 第58-60页 |
| ·结论 | 第58页 |
| ·展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |