| 中文摘要 | 第1-14页 |
| 英文摘要 | 第14-16页 |
| 1 引言 | 第16-30页 |
| ·RA 的病因及治疗药物的研究进展 | 第16-19页 |
| ·RA 的病因 | 第16-17页 |
| ·RA 的治疗药物 | 第17-19页 |
| ·白细胞介素-17 的结构特征及其生物学活性 | 第19-22页 |
| ·白细胞介素-17 的结构 | 第19-20页 |
| ·白细胞介素-17 的受体 | 第20页 |
| ·白细胞介素-17 的生物学活性 | 第20-22页 |
| ·白细胞介素-17 与疾病的关系 | 第22-26页 |
| ·白细胞介素-17 与类风湿性关节炎的关系 | 第22-23页 |
| ·白细胞介素-17 与呼吸系统疾病的关系 | 第23-25页 |
| ·白细胞介素-17 与神经系统的关系 | 第25页 |
| ·白细胞介素-17 与器官移植后排斥反应的关系 | 第25-26页 |
| ·白细胞介素-17 与其他疾病的关系 | 第26页 |
| ·白细胞介素-17 家族其他成员 | 第26-28页 |
| ·白细胞介素-17B | 第26-27页 |
| ·白细胞介素-17C | 第27页 |
| ·白细胞介素-17D | 第27页 |
| ·白细胞介素-17E | 第27-28页 |
| ·白细胞介素-17F | 第28页 |
| ·小鼠白细胞介素-17 的结构及表达 | 第28页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第28-30页 |
| 2 材料 | 第30-32页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·克隆和表达载体 | 第30页 |
| ·酶和生化试剂 | 第30-31页 |
| ·主要仪器和设备 | 第31-32页 |
| 3 方法 | 第32-48页 |
| ·小鼠白细胞介素-17 基因的克隆及序列分析 | 第32-35页 |
| ·经LPS 刺激的小鼠胸腺及脾脏细胞RNA 的提取 | 第32页 |
| ·PCR 模板的制备 | 第32-33页 |
| ·小鼠成熟白细胞介素-17 基因的PCR 扩增 | 第33页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第33-34页 |
| ·PCR 纯化产物与克隆载体的连接 | 第34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·重组克隆载体的转化与质粒的提取 | 第34-35页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定与测序 | 第35页 |
| ·重组原核表达质粒pHisSUMO Express-SUMO-mIL-17 的构建 | 第35-38页 |
| ·目的基因片段的制备 | 第35-36页 |
| ·原核表达载体pHisSUMO Express 的制备 | 第36-37页 |
| ·原核表达载体pHisSUMO Express 与目的基因片段的连接 | 第37页 |
| ·重组原核表达载体的转化与质粒提取 | 第37页 |
| ·重组原核表达载体的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·SUMO-mIL-17 融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第38-39页 |
| ·阳性重组质粒转化表达宿主菌 | 第38页 |
| ·重组工程菌的鉴定 | 第38页 |
| ·SUMO-mIL-17 融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第38-39页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·Ni-NTA 纯化柱的平衡 | 第39页 |
| ·融合蛋白SUMO-mIL-17 的纯化 | 第39页 |
| ·成熟mIL-17 的纯化 | 第39-40页 |
| ·Ni-NTA 树脂的再生与保存 | 第40页 |
| ·重组原核表达质粒的pHisSUMO Express-mIL-17 构建 | 第40-42页 |
| ·目的基因片段的制备 | 第40-41页 |
| ·原核表达载体pHisSUMO Express 的制备 | 第41页 |
| ·原核表达载体pHisSUMO Express 与目的基因片段的连接 | 第41页 |
| ·重组原核表达载体的转化与质粒提取 | 第41-42页 |
| ·重组原核表达载体的酶切鉴定及测序 | 第42页 |
| ·小鼠白细胞介素-17 成熟蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第42-43页 |
| ·阳性重组质粒转化表达宿主菌 | 第42页 |
| ·重组工程菌的鉴定 | 第42页 |
| ·小鼠白细胞介素-17 成熟蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第42-43页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| ·HiLoad 16/60 Superdex 75 pg (GE)柱的平衡及保存 | 第43页 |
| ·成熟mIL-17 的纯化 | 第43-44页 |
| ·Western blot 检测mIL-17 的特异性 | 第44页 |
| ·在细胞水平上检测重组成熟mIL-17 蛋白的生物活性 | 第44-46页 |
| ·Realtime-PCR 检测引物的设计 | 第44-45页 |
| ·3T3-L1 前体脂肪细胞的培养与刺激 | 第45页 |
| ·Realtime-PCR 鉴定蛋白活性 | 第45-46页 |
| ·在动物水平上检测重组成熟mIL-17 蛋白的生物活性 | 第46-48页 |
| ·鸡Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂混和乳化剂（CIA）的制备 | 第46-47页 |
| ·大鼠II 型胶原诱导的关节炎模型的建立 | 第47页 |
| ·mIL-17 的注射 | 第47页 |
| ·踝关节组织的采集 | 第47-48页 |
| 4 实验结果 | 第48-59页 |
| ·小鼠白细胞介素-17（mIL-17）成熟多肽基因的克隆 | 第48-49页 |
| ·小鼠白细胞介素17 成熟多肽基因的RT-PCR 扩增 | 第48页 |
| ·重组克隆质粒pMD18-T-mIL-17 的鉴定 | 第48-49页 |
| ·小鼠白细胞介素17 cDNA 序列测定与结果分析 | 第49页 |
| ·重组原核表达载体的构建 | 第49-51页 |
| ·pHisSUMO Express 表达载体和mIL-17 基因插入片段的制备 | 第49-50页 |
| ·阳性重组质粒的筛选与鉴定 | 第50页 |
| ·阳性重组工程菌的筛选与鉴定 | 第50-51页 |
| ·小鼠白细胞介素-17 蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第51-53页 |
| ·SDS-PAGE 确定SUMO-mIL-17 的表达形式及最佳诱导条件 | 第51-52页 |
| ·SDS-PAGE 确定mIL-17 的表达形式及最佳诱导时间 | 第52-53页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| ·SUMO-mIL-17 融合蛋白的纯化、酶切及分离 | 第53页 |
| ·mIL-17 成熟蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| ·Western blot 检测 | 第54页 |
| ·细胞水平上检测重组成熟mIL-17 蛋白的生物活性 | 第54-55页 |
| ·动物水平上检测重组成熟mIL-17 蛋白的生物活性 | 第55-59页 |
| ·实验动物的临床症状 | 第55-56页 |
| ·组织病理学变化 | 第56-59页 |
| 5 讨论 | 第59-63页 |
| ·PCR 模板的制备 | 第59页 |
| ·表达载体的选择和构建 | 第59-60页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第60-62页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第61页 |
| ·包涵体的纯化 | 第61-62页 |
| ·目的蛋白的活性检测 | 第62-63页 |
| ·在细胞水平上检测重组成熟mIL-17 蛋白生物活性 | 第62页 |
| ·在动物水平上检测重组成熟mIL-17 蛋白生物活性 | 第62-63页 |
| 6 结论 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 附录A | 第73-74页 |
| 附录B | 第74-75页 |
| 附录C | 第75-76页 |
| 附录D | 第76-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第78页 |
