| 致谢 | 第1-9页 |
| 英文缩略词 | 第9-11页 |
| 摘要 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-22页 |
| ·中华大蟾蜍的种质特性 | 第12页 |
| ·中枢神经受损后再生的研究 | 第12-14页 |
| ·20世纪初成年动物中枢神经是否能够再生的结论 | 第12页 |
| ·20世纪后半叶发现成年动物中枢神经具有再生能力 | 第12-13页 |
| ·从鱼类、两爬动物到哺乳动物对CNS再生能力的认识 | 第13页 |
| ·神经再生微环境中的主要分子 | 第13-14页 |
| ·生长相关蛋白-43(GAP-43)的研究 | 第14-21页 |
| ·GAP-43的发现、结构特点和进化 | 第14-15页 |
| ·GAP-43的组织分布 | 第15-17页 |
| ·脑区 | 第15-16页 |
| ·脊髓和背根神经节 | 第16页 |
| ·神经胶质细胞 | 第16-17页 |
| ·GAP-43的表达调控 | 第17页 |
| ·GAP-43的作用机制 | 第17-19页 |
| ·与膜骨架的关系及膜连接作用 | 第17-18页 |
| ·GAP-43与钙调素的关系 | 第18页 |
| ·磷酸化和去磷酸化 | 第18页 |
| ·在信号传递中的作用 | 第18-19页 |
| ·GAP-43参与神经元的发育和再生 | 第19-20页 |
| ·GAP-43参与神经元的发育 | 第19页 |
| ·GAP-43参与神经元的再生 | 第19-20页 |
| ·与GAP-43相关的疾病 | 第20页 |
| ·两爬动物中GAP-43的研究进展 | 第20-21页 |
| ·本研究的意义 | 第21-22页 |
| 2 引言 | 第22-23页 |
| 3 材料和方法 | 第23-36页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·实验样品 | 第23页 |
| ·仪器与设备 | 第23页 |
| ·试剂盒、菌种、质粒及工具酶 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·溶液配制方法 | 第23-26页 |
| ·中华大蟾蜍GAP-43基因的克隆 | 第26-30页 |
| ·引物设计与合成 | 第26页 |
| ·GAP-43基因编码序列的扩增 | 第26-28页 |
| ·脑组织总RNA的提取和检测 | 第26页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第26-27页 |
| ·普通PCR反应 | 第27-28页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第28页 |
| ·纯化后PCR产物的连接 | 第28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28-29页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·连接产物的E.coli DH5α转化 | 第29页 |
| ·PMD18T-GAP43重组体的鉴定 | 第29-30页 |
| ·β-半乳糖苷基因插入失活筛选 | 第29页 |
| ·重组质粒的菌液PCR筛选 | 第29页 |
| ·重组质粒DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的测序 | 第30页 |
| ·中华大蟾蜍GAP-43基因的生物信息学分析 | 第30页 |
| ·中华大蟾蜍GAP-43基因编码序列与其他物种间的同源性分析 | 第30页 |
| ·中华大蟾蜍GAP-43蛋白序列的推导及与其他物种间的同源性分析 | 第30页 |
| ·GAP-43氨基酸进化树的构建 | 第30页 |
| ·中华大蟾蜍GAP-43蛋白的结构预测 | 第30页 |
| ·中华大蟾蜍GAP-43基因的原核表达 | 第30-36页 |
| ·表达引物的设计 | 第31页 |
| ·GAP-43编码序列的PCR扩增 | 第31页 |
| ·pET32a表达载体的大量制备 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第32页 |
| ·纯化后PCR产物和pET32a表达载体的酶切 | 第32页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第32页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第32页 |
| ·连接产物的E.coli DH5α转化 | 第32页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的菌液PCR筛选 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的提取 | 第33页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒的测序 | 第33页 |
| ·重组质粒的E.coli BL21转化 | 第33页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及检测 | 第33-34页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第33页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE检测 | 第33-34页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第34-35页 |
| ·适宜IPTG浓度的确定 | 第34页 |
| ·适宜诱导温度的确定 | 第34-35页 |
| ·适宜诱导时间的确定 | 第35页 |
| ·重组蛋白的提取及纯化 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的提取 | 第35页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| 4 结果与分析 | 第36-48页 |
| ·中华大蟾蜍GAP-43基因的克隆 | 第36-38页 |
| ·脑组织总RNA的提取和检测 | 第36页 |
| ·GAP-43基因编码序列的PCR扩增 | 第36页 |
| ·PMD18T-GAP43重组体的鉴定 | 第36-37页 |
| ·PMD18T-GAP43重组体的测序 | 第37-38页 |
| ·中华大蟾蜍GAP-43基因的生物信息学分析 | 第38-43页 |
| ·中华大蟾蜍GAP-43基因编码序列与其他物种间的同源性分析 | 第38页 |
| ·中华大蟾蜍GAP-43蛋白序列的推导及与其他物种间的同源性分析 | 第38-40页 |
| ·GAP-43氨基酸进化树的构建 | 第40页 |
| ·中华大蟾蜍GAP-43蛋白的结构分析 | 第40-43页 |
| ·GAP-43氨基酸序列分析 | 第40-41页 |
| ·亲水性预测 | 第41页 |
| ·信号肽预测 | 第41-42页 |
| ·跨膜区域的预测 | 第42-43页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第43页 |
| ·二级结构的预测 | 第43页 |
| ·中华大蟾蜍GAP-43基因的原核表达 | 第43-48页 |
| ·pET32a-GAP-43重组质粒的筛选 | 第44-46页 |
| ·带酶切位点GAP-43编码序列的PCR扩增 | 第44页 |
| ·重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第44页 |
| ·pET32a-GAP-43重组质粒的提取 | 第44-45页 |
| ·pET32a-GAP-43重组质粒的PCR鉴定 | 第45页 |
| ·pET32a-GAP-43重组质粒的双酶切鉴定 | 第45页 |
| ·pET32a-GAP-43重组质粒的测序鉴定 | 第45-46页 |
| ·GAP-43的诱导表达及条件的优化 | 第46-47页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第46页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第46-47页 |
| ·GAP-43诱导表达蛋白的纯化 | 第47-48页 |
| 5 讨论与结论 | 第48-54页 |
| ·讨论 | 第48-52页 |
| ·GAP-43编码序列的克隆与序列分析 | 第48-50页 |
| ·总RNA的提取 | 第48页 |
| ·GAP-43编码序列的克隆与测序 | 第48-49页 |
| ·GAP-43氨基酸序列的分析 | 第49-50页 |
| ·中华大蟾蜍GAP-43蛋白的结构分析 | 第50页 |
| ·中华大蟾蜍GAP-43基因的原核表达 | 第50-52页 |
| ·原核表达载体的选择 | 第50-51页 |
| ·稀有密码子对蛋白表达的影响 | 第51-52页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第52页 |
| ·糖基化的影响 | 第52页 |
| ·结论 | 第52-54页 |
| ·克隆和序列分析 | 第52-53页 |
| ·结构预测 | 第53页 |
| ·表达与纯化 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 英文摘要 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-64页 |
