| 英文缩略词 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| 英文摘要 | 第14-18页 |
| 前言 | 第18-22页 |
| 第一部分 OY-TES-1 对肝癌细胞生物学行为影响的体外实验研究 | 第22-78页 |
| 一、构建真核表达载体及筛选用于转染的细胞株 | 第22-47页 |
| 1 材料 | 第22-25页 |
| ·质粒、菌种和细胞株 | 第22-23页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·试剂及溶液配制 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-38页 |
| ·构建 pEGFP-N1/OY-TES-1 真核表达载体 | 第25-31页 |
| ·引物的设计及合成 | 第25页 |
| ·质粒的扩增与提取 | 第25-26页 |
| ·目的基因片段的PCR 扩增 | 第26-27页 |
| ·目的基因及质粒的酶切处理 | 第27页 |
| ·质粒 DNA 的去磷酸化处理 | 第27-28页 |
| ·酶切片段的纯化回收 | 第28-29页 |
| ·目的基因片段与pEGFP-N1 质粒的连接 | 第29页 |
| ·质粒转化宿主菌 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第30-31页 |
| ·筛选用于转染的肿瘤细胞株 | 第31-38页 |
| ·细胞的常规培养 | 第31-34页 |
| ·RT-PCR | 第34-38页 |
| 3 结果 | 第38-45页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第38页 |
| ·OY-TES-1 的 PCR 扩增 | 第38-39页 |
| ·pEGFP-N1 质粒的酶切处理 | 第39页 |
| ·酶切产物的纯化回收 | 第39页 |
| ·连接反应体系的确定 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的DNA 提取及电泳 | 第40页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第40页 |
| ·质粒测序及序列比对 | 第40-44页 |
| ·OY-TES-1 转染细胞株的筛选 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 二、pEGFP-N1/ OY-TES-1 转染肝癌细胞及其鉴定 | 第47-62页 |
| 1 材料 | 第47页 |
| ·细胞株 | 第47页 |
| ·主要试剂及培养基 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47页 |
| ·试剂及溶液配制 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-54页 |
| ·无内毒素质粒的扩增及提取 | 第47-49页 |
| ·细胞的常规培养 | 第49页 |
| ·G418 筛选浓度的确立 | 第49页 |
| ·质粒DNA 的转染 | 第49-52页 |
| ·转染条件的优化 | 第49-50页 |
| ·质粒DNA 的稳定转染 | 第50-51页 |
| ·转染细胞的单克隆化 | 第51-52页 |
| ·鉴定稳定转染的细胞 | 第52-54页 |
| ·mRNA 水平的鉴定 | 第52页 |
| ·蛋白水平的鉴定 | 第52-54页 |
| 3 结果 | 第54-60页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第54页 |
| ·G418 筛选浓度的确立 | 第54-55页 |
| ·转染条件的优化 | 第55页 |
| ·转染细胞的形态观察 | 第55页 |
| ·转染效率的评价 | 第55页 |
| ·质粒DNA 的稳定转染 | 第55-58页 |
| ·稳定转染细胞的鉴定 | 第58-60页 |
| ·mRNA 水平的鉴定 | 第58页 |
| ·蛋白质水平的鉴定 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 三、OY-TES-1 转染对肝癌细胞的生长、增殖及迁移的影响 | 第62-78页 |
| 1 材料 | 第62页 |
| ·细胞 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·主要仪器设备 | 第62页 |
| ·试剂及溶液配制 | 第62页 |
| 2 方法 | 第62-66页 |
| ·稳定转染后细胞的形态观察 | 第62-63页 |
| ·观察细胞的生长情况 | 第63-64页 |
| ·细胞计数法 | 第63页 |
| ·MTT 比色法 | 第63-64页 |
| ·平板克隆形成实验 | 第64-65页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期 | 第65页 |
| ·划痕修复实验 | 第65-66页 |
| 3 结果 | 第66-76页 |
| ·稳定转染后的细胞形态 | 第66页 |
| ·稳定转染后的细胞生长情况 | 第66-69页 |
| ·细胞计数法绘制生长曲线 | 第66-68页 |
| ·MTT 比色法绘制生长曲线 | 第68-69页 |
| ·平板克隆形成实验 | 第69-71页 |
| ·细胞周期的检测 | 第71-73页 |
| ·划痕修复实验 | 第73-76页 |
| 4 讨论 | 第76-78页 |
| 第二部分 OY-TES-1 在结直肠癌和脑膜瘤的表达及临床意义分析 | 第78-100页 |
| 一、OY-TES-1 在结直肠癌的表达及临床意义分析 | 第78-93页 |
| 1 材料 | 第78-79页 |
| ·标本 | 第78页 |
| ·临床病理资料 | 第78-79页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第79页 |
| ·主要仪器设备 | 第79页 |
| ·试剂及溶液配制 | 第79页 |
| 2 方法 | 第79-81页 |
| ·RT-PCR | 第79-80页 |
| ·组织切片染色 | 第80页 |
| ·免疫组织化学 | 第80页 |
| ·HE 染色 | 第80页 |
| ·统计分析 | 第80-81页 |
| 3 结果 | 第81-90页 |
| ·结直肠癌和腺瘤组织总RNA 的检测 | 第81页 |
| ·结直肠癌和腺瘤OY-TES-1mRNA 的检测 | 第81-82页 |
| ·结直肠癌和腺瘤 OY-TES-1 蛋白的检测 | 第82-88页 |
| ·结直肠癌中 OY-TES-1mRNA 和蛋白的表达 | 第88页 |
| ·结直肠癌表达 OY-TES-1 的临床意义 | 第88-90页 |
| 4 讨论 | 第90-93页 |
| 二、OY-TES-1 在脑膜瘤的表达及临床意义分析 | 第93-100页 |
| 1 材料 | 第93页 |
| ·标本 | 第93页 |
| ·临床病理资料 | 第93页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第93页 |
| ·主要仪器设备 | 第93页 |
| ·试剂及溶液配制 | 第93页 |
| 2 方法 | 第93页 |
| 3 结果 | 第93-98页 |
| ·脑膜瘤组织总RNA 的检测 | 第93-94页 |
| ·脑膜瘤 OY-TES-1mRNA 的检测 | 第94页 |
| ·脑膜瘤 OY-TES-1 蛋白的检测 | 第94页 |
| ·脑膜瘤 OY-TES-1mRNA 与蛋白的表达 | 第94-97页 |
| ·脑膜瘤OY-TES-1 表达的临床意义 | 第97-98页 |
| 4 讨论 | 第98-100页 |
| 第三部分 结直肠癌和脑膜瘤患者血清 OY-TES-1 抗体的检测 | 第100-123页 |
| 1 材料 | 第100-101页 |
| ·标本 | 第100页 |
| ·临床病理资料 | 第100-101页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第101页 |
| ·主要仪器设备 | 第101页 |
| ·试剂及溶液配制 | 第101页 |
| 2 方法 | 第101-107页 |
| ·MBP/OY-TES-1 融合蛋白的制备 | 第101-104页 |
| ·感受态细胞的制备(TSB 法) | 第101-102页 |
| ·重组质粒的转化 | 第102页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第102页 |
| ·融合蛋白的分离纯化 | 第102-103页 |
| ·融合蛋白的电泳鉴定 | 第103-104页 |
| ·融合蛋白的定量 | 第104页 |
| ·间接ELISA 操作流程 | 第104-105页 |
| ·抗原包被浓度和血清稀释度的测定 | 第105页 |
| ·二抗和酶标记物最佳工作浓度的确定 | 第105-106页 |
| ·血清的检测方法 | 第106页 |
| ·血清OD 值的计算 | 第106页 |
| ·阳性血清的判断 | 第106页 |
| ·ELISA 重复性实验 | 第106-107页 |
| ·统计分析 | 第107页 |
| 3 结果 | 第107-119页 |
| ·MBP/OY-TES-1融合蛋白的电泳鉴定 | 第107页 |
| ·抗原和血清最佳稀释度 | 第107-110页 |
| ·二抗和酶标记物最佳工作浓度 | 第110-112页 |
| ·正常人血清的检测 | 第112页 |
| ·阳性血清的判断 | 第112页 |
| ·结直肠癌患者血清 OY-TES-1 抗体检测结果 | 第112-113页 |
| ·结直肠癌患者血清ELISA 重复性实验 | 第113-114页 |
| ·脑膜瘤患者血清 OY-TES-1 抗体检测结果 | 第114-115页 |
| ·脑膜瘤患者血清重复性实验 | 第115-116页 |
| ·OY-TES-1 血清抗体与其表达的关系 | 第116-119页 |
| 4 讨论 | 第119-123页 |
| 全文小结 | 第123-124页 |
| 正文参考文献 | 第124-135页 |
| 附录 | 第135-140页 |
| 综述一 肝细胞癌免疫治疗的新靶标——CT 抗原 | 第140-159页 |
| 正文 | 第140-149页 |
| 参考文献 | 第149-159页 |
| 综述二 癌-睾丸抗原 NY-ESO-1 抗原肽 表位特性鉴定及其多肽疫苗研究 | 第159-169页 |
| 正文 | 第159-166页 |
| 参考文献 | 第166-169页 |
| 致谢 | 第169-170页 |
| 攻读学位期间发表的论文目录 | 第170页 |
