| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 缩略词 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-34页 |
| 1. 戊型肝炎病毒 | 第14-25页 |
| 1.1 戊型肝炎概述 | 第14-19页 |
| 1.2 戊型肝炎病毒的结构构成 | 第19-24页 |
| 1.3 戊型肝炎疫苗的研究进展 | 第24-25页 |
| 2. 单克隆抗体研究概述 | 第25-34页 |
| 2.1 抗体的结构与功能 | 第25-27页 |
| 2.2 B细胞的分化和成熟 | 第27-29页 |
| 2.3 单克隆抗体的应用 | 第29-30页 |
| 2.4 单克隆抗体的获取 | 第30-34页 |
| 第二章 材料与方法 | 第34-63页 |
| 1. 材料 | 第34-45页 |
| 1.1 主要仪器 | 第34-36页 |
| 1.2 主要实验耗材 | 第36页 |
| 1.3 常用质粒、菌株、细胞 | 第36-37页 |
| 1.3.1 常用质粒 | 第36页 |
| 1.3.2 常用菌株 | 第36-37页 |
| 1.3.3 细胞株 | 第37页 |
| 1.4 主要试剂 | 第37-38页 |
| 1.4.1 PCR扩增及分子克隆用试剂 | 第37页 |
| 1.4.2 细胞培养及转染用试剂 | 第37页 |
| 1.4.3 质粒及样品核酸提取试剂 | 第37页 |
| 1.4.4 抗原、抗体、酶标记抗体及显色底物 | 第37-38页 |
| 1.4.5 其他常规试剂 | 第38页 |
| 1.5 实验用溶液配制 | 第38-40页 |
| 1.5.1 分子生物学实验所用液体配制 | 第38页 |
| 1.5.2 包涵体洗涤试剂 | 第38页 |
| 1.5.3 PBS(pH 7.45) | 第38页 |
| 1.5.4 磷酸缓冲液(CB,pH9.6) | 第38页 |
| 1.5.5 Western-blotting相关试剂 | 第38-39页 |
| 1.5.6 细胞生物学实验用试剂配制 | 第39页 |
| 1.5.7 ELISA液体配制 | 第39页 |
| 1.5.8 单抗细胞培养基溶液配制 | 第39-40页 |
| 1.6 分子克隆实验中所涉及使用的引物 | 第40-45页 |
| 1.6.1 定点突变所用引物 | 第40-42页 |
| 1.6.2 Real-time PCR定量检测引物 | 第42页 |
| 1.6.3 巢式PCR引物 | 第42-43页 |
| 1.6.4 表达克隆引物 | 第43-45页 |
| 2. 方法 | 第45-63页 |
| 2.1 分子克隆 | 第45-47页 |
| 2.2 单克隆抗体的制备和纯化 | 第47-49页 |
| 2.3 抗原蛋白的表达及生物素标记 | 第49-54页 |
| 2.4 p239特异性记忆B细胞分选 | 第54-55页 |
| 2.5 单细胞RT-PCR | 第55-57页 |
| 2.6 pMD18-T载体载体构建和测序2.6.1 T载体构建 | 第57页 |
| 2.7 表达载体构建 | 第57-59页 |
| 2.8 抗体表达 | 第59-60页 |
| 2.9 抗原特异性检测 | 第60页 |
| 2.10 原位酶联免疫吸附实验(抗体中和活性测定) | 第60-61页 |
| 2.11 酶联免疫吸附实验(抗体交叉阻断、敏感性氨基酸分析) | 第61-63页 |
| 第三章 结果与分析 | 第63-86页 |
| 1. p239的表达与纯化 | 第63页 |
| 2. p239的荧光标记 | 第63-65页 |
| 3. HEV特异记忆B细胞染色方案的优化 | 第65-68页 |
| 4. p239抗原加入量摸索 | 第68-69页 |
| 5. 分选HEV特异的记忆B细胞 | 第69-70页 |
| 6. 单细胞PCR | 第70-71页 |
| 7. 抗体基因分析 | 第71-72页 |
| 8. 表达克隆的构建及抗体表达 | 第72-75页 |
| 8.1 构建抗体表达克隆 | 第72-73页 |
| 8.2 抗体的小量表达鉴定 | 第73页 |
| 8.3 抗体的大量表达 | 第73-75页 |
| 9. 抗体反应性检测 | 第75-76页 |
| 10. 抗体中和活性检测 | 第76-77页 |
| 11. 抗体关键识别位点鉴定 | 第77-80页 |
| 12. 人源单克隆抗体阻断鼠源单克隆抗体性质分析 | 第80-86页 |
| 第四章 讨论 | 第86-90页 |
| 1. 人源抗体筛选平台的建立及应用 | 第86-87页 |
| 1.1 抗原荧光标记 | 第86-87页 |
| 1.2 记忆B细胞染色方案优化 | 第87页 |
| 2. 抗HEV人源单克隆抗体性质分析 | 第87-90页 |
| 第五章 小结与展望 | 第90-92页 |
| 1. 小结 | 第90页 |
| 2. 展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-104页 |
| 附录 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
