| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文名词缩写表 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-33页 |
| 1.1 烯醇还原酶简介 | 第17-20页 |
| 1.1.1 烯醇还原酶简介 | 第17页 |
| 1.1.2 烯醇还原酶的分类 | 第17-18页 |
| 1.1.3 烯醇还原酶的作用机制 | 第18-19页 |
| 1.1.4 烯醇还原酶的应用 | 第19-20页 |
| 1.2 芳香族化合物 | 第20-24页 |
| 1.2.1 莽草酸途径中的酶 | 第20-22页 |
| 1.2.2 芳香有机酸的的生物合成途径 | 第22-24页 |
| 1.3 己二酸 | 第24-30页 |
| 1.3.1 己二酸的应用 | 第25-26页 |
| 1.3.2 己二酸的生物合成途径 | 第26-28页 |
| 1.3.3 粘糠酸的生物合成途径 | 第28-30页 |
| 1.4 立题目的及意义 | 第30页 |
| 1.5 本论文研究内容 | 第30-33页 |
| 第二章 常规实验方法 | 第33-43页 |
| 2.1 仪器 | 第33页 |
| 2.2 试剂 | 第33页 |
| 2.3 培养基 | 第33页 |
| 2.4 基因组的提取 | 第33-34页 |
| 2.5 质粒提取 | 第34-35页 |
| 2.6 PCR | 第35-36页 |
| 2.6.1 克隆PCR | 第35页 |
| 2.6.2 验证PCR | 第35-36页 |
| 2.7 酶切 | 第36页 |
| 2.8 DNA产物的回收 | 第36-37页 |
| 2.8.1 液体回收 | 第36页 |
| 2.8.2 胶回收 | 第36-37页 |
| 2.9 琼脂糖凝胶电泳 | 第37-38页 |
| 2.10 连接和转化 | 第38页 |
| 2.11 感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| 2.11.1 感受态细胞的制备(化学法) | 第38-39页 |
| 2.11.2 感受态细胞的制备(电转法) | 第39页 |
| 2.12 OD_(600)测定细胞浓度 | 第39页 |
| 2.13 使用Red重组技术进行基因敲除 | 第39-40页 |
| 2.14 使用厌氧操作台 | 第40-41页 |
| 2.15 His标签蛋白的表达和纯化 | 第41-43页 |
| 2.15.1 目的蛋白的表达 | 第41页 |
| 2.15.2 细胞的破碎 | 第41页 |
| 2.15.3 蛋白纯化 | 第41-42页 |
| 2.15.4 蛋白浓度的测定 | 第42-43页 |
| 第三章 对羟基苯丙酸的生物合成 | 第43-61页 |
| 3.1 前言 | 第43-44页 |
| 3.2 材料与方法 | 第44-50页 |
| 3.2.1 菌种 | 第44页 |
| 3.2.2 培养基 | 第44-45页 |
| 3.2.3 质粒的构建 | 第45-48页 |
| 3.2.4 通过体内酶活测试筛选ER | 第48-49页 |
| 3.2.5 转化实验 | 第49页 |
| 3.2.6 生物合成HPPA | 第49页 |
| 3.2.7 HPLC检测 | 第49-50页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第50-58页 |
| 3.3.1 筛选烯醇还原酶 | 第50-55页 |
| 3.3.2 表达策略对酪氨酸转化为HPPA的影响 | 第55-57页 |
| 3.3.3 通过改造苯丙氨酸高产菌获得香豆酸高产菌株 | 第57-58页 |
| 3.3.4 构建HPPA的生物合成途径 | 第58页 |
| 3.4 小结 | 第58-61页 |
| 第四章 苯丙酸的生物合成 | 第61-85页 |
| 4.1 前言 | 第61页 |
| 4.2 材料与方法 | 第61-67页 |
| 4.2.1 菌种和培养基 | 第61-63页 |
| 4.2.2 质粒的构建 | 第63-65页 |
| 4.2.3 肉桂酸添加实验 | 第65-66页 |
| 4.2.4 转化实验 | 第66页 |
| 4.2.5 生物合成3PPA | 第66页 |
| 4.2.6 辅酶再生系统 | 第66-67页 |
| 4.2.7 共培养系统 | 第67页 |
| 4.2.8 RED同源重组 | 第67页 |
| 4.2.9 HPLC检测 | 第67页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第67-83页 |
| 4.3.1 肉桂酸为底物时CaER的体内酶活测试 | 第68-69页 |
| 4.3.2 表达策略对苯丙氨酸转化为3PPA的影响 | 第69-71页 |
| 4.3.3 通过改造苯丙氨酸高产菌获得肉桂酸高产菌株 | 第71-73页 |
| 4.3.4 构建3PPA的生物合成途径 | 第73页 |
| 4.3.5 辅酶再生系统 | 第73-75页 |
| 4.3.6 转速对产量的影响 | 第75页 |
| 4.3.7 共培养对产量的影响 | 第75-78页 |
| 4.3.8 优化启动子的研究 | 第78-81页 |
| 4.3.9 RED同源重组实现3PPA的生物合成 | 第81-83页 |
| 4.3.10 酶的固定化研究 | 第83页 |
| 4.4 小结 | 第83-85页 |
| 第五章 己二酸的生物合成 | 第85-101页 |
| 5.1 前言 | 第85-86页 |
| 5.2 材料与方法 | 第86-89页 |
| 5.2.1 菌种和培养基 | 第86-87页 |
| 5.2.2 质粒的构建 | 第87-88页 |
| 5.2.3 转化实验 | 第88-89页 |
| 5.2.4 己二酸的生物合成 | 第89页 |
| 5.2.5 共培养对己二酸产量的影响 | 第89页 |
| 5.2.6 HPLC检测 | 第89页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第89-98页 |
| 5.3.1 添加粘糠酸的体内酶活测试 | 第90-91页 |
| 5.3.2 添加水杨酸的生物转化实验 | 第91-92页 |
| 5.3.3 构建新的己二酸生物合成途径 | 第92-94页 |
| 5.3.4 共培养对己二酸产量的影响 | 第94-95页 |
| 5.3.5 血红蛋白对己二酸产量的影响 | 第95-96页 |
| 5.3.6 戊烯二酸的生物合成 | 第96-98页 |
| 5.4 小结 | 第98-101页 |
| 第六章 结论与展望 | 第101-105页 |
| 参考文献 | 第105-117页 |
| 附录1 候选烯醇还原酶与RgTAL序列 | 第117-127页 |
| 附录2 gapA, vgb,fdh1, T7 RNAP序列 | 第127-131页 |
| 附录3 bcer序列 | 第131-133页 |
| 致谢 | 第133-135页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第135-137页 |
| 作者简介 | 第137页 |
| 导师简介 | 第137-139页 |
| 附录 | 第139-140页 |
