| 中文摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第11-14页 |
| 第一部分 TNFα对成骨分化的影响以及NF-κB信号通路在其中的作用 | 第14-33页 |
| 1 实验材料与主要仪器 | 第14-19页 |
| 1.1 实验材料 | 第14页 |
| 1.2 主要试剂 | 第14-16页 |
| 1.3 主要仪器 | 第16页 |
| 1.4 主要试剂的配置 | 第16-19页 |
| 2.实验方法 | 第19-25页 |
| 2.1 细胞培养 | 第19页 |
| 2.2 慢病毒质粒PLKo.1-shp65-441/1663的构建 | 第19-21页 |
| 2.3 慢病毒包装 | 第21页 |
| 2.4 慢病毒构建MC3T3-E1subclone14shp65稳转细胞系 | 第21页 |
| 2.5 实时荧光定量PCR | 第21-23页 |
| 2.6 碱性磷酸酶活性分析 | 第23-24页 |
| 2.7 成骨细胞矿化程度Vonkasso染色 | 第24页 |
| 2.8 蛋白免疫印迹(Westernblot) | 第24-25页 |
| 2.9 免疫荧光(Immunofluorescence) | 第25页 |
| 3.结果 | 第25-31页 |
| 3.1 MC3T3-E1细胞成骨细胞的分化和矿化能力检测 | 第25-26页 |
| 3.2 TNFα对MAPK、AKT、NF-κB信号通路的影响 | 第26-28页 |
| 3.3 TNFα长时间处理激活NF-κB信号通路并抑制成骨分化 | 第28-30页 |
| 3.4 敲降p65影响Runx2的表达水平但不能拯救TNFα对Runx2的抑制作用 | 第30-31页 |
| 4.讨论 | 第31-33页 |
| 第二部分 Glut1在TNFα影响成骨分化过程中作用的研究 | 第33-43页 |
| 1 实验材料与主要仪器 | 第33-34页 |
| 1.1 实验材料 | 第33页 |
| 1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 1.3 主要仪器 | 第33-34页 |
| 1.4 主要试剂的配置 | 第34页 |
| 2.实验方法 | 第34-37页 |
| 2.1 ALP染色实验 | 第34页 |
| 2.2 慢病毒构建shGlut1稳转细胞株的实验方法同第一部分实验方法(2.2-2.4)。 | 第34页 |
| 2.3 构建过表达Glut1慢病毒质粒 | 第34-37页 |
| 3.结果 | 第37-41页 |
| 3.1 TNFα短时间处理促进Glut1蛋白水平的表达,长时间处理抑制Glut1蛋白水平的表达 | 第37-38页 |
| 3.2 敲降Glut1抑制Runx2的表达和ALP酶活 | 第38-39页 |
| 3.3 过表达Glut1促进Runx2蛋白的表达但不能拯救TNFα对Runx2的抑制作用 | 第39-40页 |
| 3.4 Glut1在TNFα抑制成骨分化进程中作用的探索总结 | 第40-41页 |
| 4.讨论 | 第41-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 综述 间充质干细胞成骨分化研究进展 | 第50-59页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 英文缩略词表 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
