| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| abstract | 第9页 |
| 第一章 绪论 | 第16-28页 |
| 1.1 噬菌体概述 | 第16-17页 |
| 1.1.1 噬菌体的生命周期 | 第16-17页 |
| 1.1.2 噬菌体在基因工程上的应用 | 第17页 |
| 1.2 噬菌体P1-广泛应用的转导工具 | 第17-19页 |
| 1.2.1 噬菌体P1的生命周期 | 第17-19页 |
| 1.2.2 噬菌体P1作为转导工具的局限性 | 第19页 |
| 1.3 P1识别的细菌表面受体-脂多糖(LPS) | 第19-24页 |
| 1.3.1 LPS的生物合成 | 第20-23页 |
| 1.3.2 LPS的转运途径 | 第23-24页 |
| 1.4 大肠杆菌Nissle1917(EcN)简介 | 第24-27页 |
| 1.4.1 EcNLPS基因及结构 | 第25-26页 |
| 1.4.2 EcNK抗原基因及结构 | 第26-27页 |
| 1.5 课题研究的目的意义及研究的主要内容 | 第27-28页 |
| 第二章 探究K抗原对P1侵染EcN的影响 | 第28-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-32页 |
| 2.1.1 材料与试剂 | 第28页 |
| 2.1.2 仪器与设备 | 第28-29页 |
| 2.1.3 菌株及质粒 | 第29-30页 |
| 2.1.4 本章实验所用引物 | 第30页 |
| 2.1.5 主要溶液配制及培养基 | 第30-31页 |
| 2.1.6 菌株培养方法 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-39页 |
| 2.2.1 E.coliNissle1917基因敲除 | 第32-35页 |
| 2.2.2 去除EcNΔkfiA::Kan中Kan抗性 | 第35页 |
| 2.2.3 噬菌体P1裂解液制备 | 第35-36页 |
| 2.2.4 P1裂解液效价测定 | 第36页 |
| 2.2.5 噬菌体P1侵染EcN | 第36页 |
| 2.2.6 噬菌体P1转导ZK126ΔrecA::Kan至EcN | 第36-37页 |
| 2.2.7 K5多糖提取及纯化方法 | 第37-39页 |
| 2.2.8 ~1HNMR分析 | 第39页 |
| 2.3 实验结果 | 第39-47页 |
| 2.3.1 噬菌体P1滴度检测 | 第39-40页 |
| 2.2.2 EcN的kfiA基因敲除 | 第40-42页 |
| 2.3.3 EcNΔkfiA::Kan抗性基因的去除 | 第42-43页 |
| 2.3.4 EcNΔkfiA生长曲线测定 | 第43页 |
| 2.3.5 ~1HNMR检测EcNΔkfiA是否表达K5荚膜多糖 | 第43-45页 |
| 2.3.6 P1侵染EcNΔkfiA | 第45页 |
| 2.3.7 P1转导ZK126ΔrecA::Kan至EcN | 第45-47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 探究O抗原对P1侵染EcN的影响 | 第49-64页 |
| 3.1 实验材料 | 第49-53页 |
| 3.1.1 材料与试剂 | 第49页 |
| 3.1.2 仪器与设备 | 第49-50页 |
| 3.1.3 菌株及质粒 | 第50-51页 |
| 3.1.4 本章实验所用引物 | 第51-52页 |
| 3.1.5 主要溶液配制及培养基 | 第52-53页 |
| 3.2 实验方法 | 第53-56页 |
| 3.2.1 质粒提取 | 第53页 |
| 3.2.2 化学感受态的制备 | 第53-54页 |
| 3.2.3 化学转化 | 第54页 |
| 3.2.4 电击转化感受态细胞的制备 | 第54页 |
| 3.2.5 电击转化 | 第54-55页 |
| 3.2.6 P1转导 | 第55页 |
| 3.2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第55页 |
| 3.2.8 E.coliNissle1917基因敲除 | 第55页 |
| 3.2.9 噬菌体P1裂解液制备 | 第55-56页 |
| 3.3 实验结果 | 第56-63页 |
| 3.3.1 脂核A表面聚合物连接酶WaaL基因敲除 | 第56-57页 |
| 3.3.2 LPSHepIIα-1,3-糖基转移酶WaaG基因敲除 | 第57-58页 |
| 3.3.3 LPSGlcIα-1,3-糖基转移酶WaaO基因敲除 | 第58-59页 |
| 3.3.4 UDP-glucose差向异构酶GalE基因敲除 | 第59-60页 |
| 3.3.5 噬菌体P1侵染EcNO抗原基因突变株 | 第60-61页 |
| 3.5.6 噬菌体P1转导ΔrecA::Kan至EcNO抗原突变株 | 第61-63页 |
| 3.4 讨论 | 第63-64页 |
| 第四章 总结 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第71-72页 |
