| 摘要 | 第8-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第14-34页 |
| 1.1 干细胞 | 第14-15页 |
| 1.2 多潜能干细胞 | 第15-25页 |
| 1.2.1 胚胎干细胞 | 第15-18页 |
| 1.2.2 诱导的多潜能干细胞 | 第18-23页 |
| 1.2.3 多潜能干细胞以临床应用为目的基础研究 | 第23-25页 |
| 1.3 多潜能干细胞的应用前景 | 第25-27页 |
| 1.4 干细胞的临床应用现状 | 第27-29页 |
| 1.5 诱导的多潜能干细胞的临床应用优势 | 第29-30页 |
| 1.6 干细胞临床标准 | 第30-32页 |
| 1.7 临床级别人诱导的多潜能干细胞的应满足的要求 | 第32-33页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-41页 |
| 2.1.1 捐献者知情同意书 | 第34页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第34页 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 | 第34-35页 |
| 2.1.4 主要试剂及试剂盒 | 第35-38页 |
| 2.1.5 常用试剂及配制 | 第38-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-54页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第41-43页 |
| 2.2.2 质粒提取 | 第43-44页 |
| 2.2.3 慢病毒的包装 | 第44-45页 |
| 2.2.4 慢病毒介导的人诱导的多潜能干细胞的建系 | 第45页 |
| 2.2.5 PCEP4-OSKN介导的人诱导的多潜能干细胞的建系 | 第45页 |
| 2.2.6 仙台病毒介导的临床级别人诱导的多潜能干细胞的建系 | 第45-46页 |
| 2.2.7 多能性检测 | 第46-47页 |
| 2.2.8 随机分化能力检测 | 第47-48页 |
| 2.2.9 定向分化能力检测 | 第48-49页 |
| 2.2.10 基本检测方法 | 第49-51页 |
| 2.2.11 生物安全性检测 | 第51-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-74页 |
| 3.1 高效地从人脐带血单个核细胞中诱导获得UCB-hiPSCs | 第54-57页 |
| 3.1.1 诱导流程的优化 | 第54-55页 |
| 3.1.2 UCB-hiPSCs具有多能性 | 第55-56页 |
| 3.1.3 UCB-hiPSCs具有三胚层随机分化能力 | 第56-57页 |
| 3.2 非整合型质粒PCEP4介导的HFF细胞重编程为Epi-hiPSCs | 第57-61页 |
| 3.2.1 Epi-hiPSCs的获得及多能性鉴定 | 第57-59页 |
| 3.2.2 Epi-hiPSCs具有三胚层随机分化能力 | 第59-60页 |
| 3.2.3 Epi-hiPSCs可以被定向诱导分化形成多巴胺能神经前体细胞 | 第60-61页 |
| 3.3 不同重编程能力人体细胞基因表达谱的分析 | 第61-64页 |
| 3.3.1 不同个体来源的人成纤维细胞具有不同的重编程能力 | 第61-62页 |
| 3.3.2 不同个体来源的人体细胞基因表达谱相似,与人胚胎干细胞有明显区别 | 第62-63页 |
| 3.3.3 重编程能力不同的体细胞基因表达差异主要集中在细胞连接蛋白和TGFβ信号通路上 | 第63-64页 |
| 3.4 临床级别非整合型hiPSCs的建系与鉴定 | 第64-74页 |
| 3.4.1 临床级别hiPSCs诱导之前的准备工作 | 第64-65页 |
| 3.4.2 用于供体细胞和饲养层细胞的临床级别HFF细胞的获得 | 第65-66页 |
| 3.4.3 临床级别HFF细胞的生物安全性鉴定和中国食品药品检定研究院的质量复核 | 第66-67页 |
| 3.4.4 临床级别iPSCs的诱导流程优化 | 第67页 |
| 3.4.5 临床级别hiPSCs具有多能性 | 第67-69页 |
| 3.4.6 临床级别hiPSCs具有三胚层随机分化能力 | 第69页 |
| 3.4.7 临床级别hiPSCs可以在无动物源性的培养基中被诱导分化形成多巴胺能神经前体细胞和心肌细胞 | 第69-70页 |
| 3.4.8 临床级别hiPSCs具有生物安全性 | 第70-74页 |
| 4 讨论 | 第74-77页 |
| 4.1 X培养液可以介导高效的人体细胞重编程,是未来hiPSCs临床应用的候选重编程液体之一 | 第74页 |
| 4.2 未来临床用iPSCs供体细胞的选择 | 第74页 |
| 4.3 未来临床用iPSCs诱导方法选择 | 第74-75页 |
| 4.4 细胞连接分子和TGFβ信号通路在细胞重编程过程扮演着重要角色 | 第75页 |
| 4.5 临床级别hiPSCs定向分化成功能细胞的条件探索有待于进一步探索 | 第75页 |
| 4.6 hiPSCs应用于临床的安全性讨论 | 第75-77页 |
| 5 结论 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-91页 |
| 附录 | 第91-93页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第93页 |
