| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-38页 |
| 1. 食源性致病菌的危害 | 第16-17页 |
| 2. 食源性致病菌检测方法研究概况 | 第17-22页 |
| 2.1 生化鉴定技术 | 第17-18页 |
| 2.2 免疫学检测技术 | 第18页 |
| 2.3 分子生物学检测方法 | 第18-22页 |
| 3. 肽核酸探针在微生物诊断领域的应用 | 第22-32页 |
| 3.1 肽核酸的理化性质 | 第23-24页 |
| 3.2 肽核酸的生物学特性 | 第24页 |
| 3.3 肽核酸探针在微生物诊断领域的应用 | 第24-31页 |
| 3.4 结论与展望 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-38页 |
| 第二章 重要食源性致病菌的肽核酸原位荧光杂交检测方法的建立 | 第38-61页 |
| 第一节 肽核酸固相原位荧光杂交检测方法的建立 | 第38-52页 |
| 1. 材料和方法 | 第38-40页 |
| 1.1 PNA探针的设计合成 | 第38-39页 |
| 1.2 细菌菌株及培养 | 第39页 |
| 1.3 PNA-FISH步骤[10] | 第39-40页 |
| 2. 结果 | 第40-49页 |
| 2.1 PNA探针设计和BLAST、ProbeCheck验证 | 第40-43页 |
| 2.2 杂交程序优化 | 第43-44页 |
| 2.3 探针灵敏度和特异性 | 第44-49页 |
| 3. 讨论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 第二节 重要食源性致病菌的双重肽核酸原位荧光杂交检测 | 第52-61页 |
| 1. 材料和方法 | 第52-54页 |
| 1.1 PNA探针及不同探针间的组合 | 第52-53页 |
| 1.2 细菌菌株及培养 | 第53页 |
| 1.3 PNA-FISH步骤 | 第53-54页 |
| 1.4 荧光形态的观察 | 第54页 |
| 1.5 图像分析处理 | 第54页 |
| 1.6 两种菌液的比例对双重PNA探针杂交结果的影响 | 第54页 |
| 2. 结果 | 第54-58页 |
| 2.1 双重PNA杂交条件 | 第54-55页 |
| 2.2 检测滤光模块的确定 | 第55-56页 |
| 2.3 双重荧光同步检测两种目标菌 | 第56-57页 |
| 2.4 两种苗含量比例对检测结果的影响 | 第57-58页 |
| 3. 讨论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 第三章 基于肽核酸原位杂交的微生物荧光形态学鉴定系统研究 | 第61-81页 |
| 1、系统需求分析 | 第61-62页 |
| 1.1 程序设计目标 | 第62页 |
| 1.2 程序设计原则 | 第62页 |
| 2、软件设计 | 第62-70页 |
| 2.1 系统建模 | 第62-64页 |
| 2.2 数据库结构设计 | 第64-65页 |
| 2.3 系统详细设计 | 第65-70页 |
| 3、系统的程序功能 | 第70-78页 |
| 3.1 系统登录和用户管理 | 第70页 |
| 3.2 系统设置模块 | 第70-71页 |
| 3.3 知识库管理模块 | 第71-73页 |
| 专家知识库检索 | 第73页 |
| 3.4 样本库管理模块 | 第73-75页 |
| 3.5 荧光片检测模块 | 第75-77页 |
| 3.6 检测报告生成和操作[13] | 第77-78页 |
| 4、讨论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-81页 |
| 第四章 肽核酸分子信标标记和荧光扫描快速检测方法 | 第81-92页 |
| 1. 材料和方法 | 第81-83页 |
| 1.1 PNA分子信标的设计 | 第81-82页 |
| 1.2 细菌培养 | 第82页 |
| 1.3 液相PNA分子信标的原位杂交 | 第82页 |
| 1.4 荧光扫描 | 第82-83页 |
| 1.5 荧光扫描结果的判断 | 第83页 |
| 1.6 显微镜观察确证 | 第83页 |
| 2. 结果与讨论 | 第83-89页 |
| 3. 总结 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-92页 |
| 第五章 基于IMS-PNA-FISH的微生物鉴定系统在主要食源性致病菌检测中的应用 | 第92-111页 |
| 第一节 基于IMS-PNA-FISH微生物鉴定系统在水产品中单增李斯特菌和弧菌检测的应用 | 第93-100页 |
| 1. 材料与方法 | 第93-96页 |
| 1.1 试验菌株 | 第93页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第93页 |
| 1.3 副溶血性弧菌定制磁珠 | 第93页 |
| 1.4 菌悬液的制备 | 第93-94页 |
| 1.5 人工污染水产品的制备 | 第94页 |
| 1.6 水产品及相关样品的采集和处理 | 第94页 |
| 1.7 免疫磁珠富集 | 第94-95页 |
| 1.8 PNA-FISH微生物鉴定 | 第95页 |
| 1.9 生化方法鉴定 | 第95-96页 |
| 2. 结果 | 第96-98页 |
| 2.1 IMS-PNA-FISH方法检测限 | 第96-97页 |
| 2.2 IMS-PNA-FISH法和国标法检测结果的比较 | 第97-98页 |
| 3. 讨论 | 第98-100页 |
| 第二节 基于IMS-PNA-FISH微生物鉴定系统在肉制品中沙门氏菌和空肠弯曲杆菌检测的应用 | 第100-105页 |
| 1. 材料与方法 | 第100-102页 |
| 1.1 试验菌株 | 第100页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第100页 |
| 1.3 菌悬液的制备 | 第100-101页 |
| 1.4 人工污染肉制品的制备 | 第101页 |
| 1.5 肉制品及相关样品的采集和处理 | 第101页 |
| 1.6 免疫磁珠富集 | 第101-102页 |
| 1.7 PNA-FISH微生物鉴定 | 第102页 |
| 1.8 生化方法鉴定 | 第102页 |
| 2. 结果 | 第102-103页 |
| 2.1 IMS-PNA-FISH方法检测限 | 第102页 |
| 2.2 IMS-PNA-FISH和国标方法的比较 | 第102-103页 |
| 2.3 肉样品及相关环境样品的检测 | 第103页 |
| 3. 讨论 | 第103-105页 |
| 第三节 基于IMS-PNA-FISH微生物鉴定系统在乳制品中沙门氏菌和阪崎克罗诺杆菌检测的应用 | 第105-109页 |
| 1. 材料与方法 | 第105-107页 |
| 1.1 试验菌株 | 第105页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第105页 |
| 1.3 菌悬液的制备 | 第105-106页 |
| 1.4 人工污染牛乳样品的制备 | 第106页 |
| 1.5 免疫磁珠富集 | 第106页 |
| 1.6 PNA-FISH微生物鉴定 | 第106页 |
| 1.7 生化方法鉴定 | 第106-107页 |
| 2. 结果 | 第107-108页 |
| 2.1 牛乳中致病菌IMS-PNA-FISH检测限 | 第107-108页 |
| 2.2 增菌富集时间的选择 | 第108页 |
| 2.3 IMS-PNA-FISH和国标方法的比较 | 第108页 |
| 3. 讨论 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-111页 |
| 附件 | 第111-113页 |
| 攻博期间成果 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
